Липолитики для сжигания жиров: Липолитики для похудения – что это? Можно ли похудеть при помощи укола?

Липолитики для похудения – что это? Можно ли похудеть при помощи укола?

Мнение

26 мая 2021

Роксана Киселева
Автор-эксперт

Выяснили, что такое липолитики, как они работают, помогают ли в борьбе за похудение — и безопасно ли вообще их применение.

Липолитики — это препараты с жиросжигающим эффектом. В косметологии принято разделять липолитики на прямые и непрямые, — они различаются принципом действия.

• Прямые липолитики расщепляют жиры в жировых клетках, и обработанная область быстро худеет. Их основные действующие вещества — дезоксихолат и фосфатидилхолин (производная лецитина). Первый растворяет клеточные мембраны, а второй — жировые клетки.
• Непрямые липолитики ничего не сжигают, а только улучшают микроциркуляцию в клетках и оказывают лимфодренажный эффект — вы тоже теряете объемы, но уходит уже не жир, а вода.

Препарат вводится на глубину от 1 см и больше, в зависимости от зоны коррекции. Процедура считается малоболезненной, восстановительный период — короткий, пара дней. Обычно курс составляет от 3-4 до 8-10 сеансов с перерывами между инъекциями не менее 10-15 дней, чтобы печень успела вывести весь «мусор» из организма. Сразу после процедуры рекомендуют сделать легкий массаж обработанной зоны, чтобы препарат не закапсулировался.

Значительно похудеть липолитики не помогут, их предел — это растворить 100-150 г жировой ткани. Поэтому косметологи рекомендуют инъекционную липосакцию только для незначительной коррекции фигуры: когда человек хочет избавиться от складки на животе или над коленями, сделать бока чуть меньше, талию немного уже и так далее.

Не всегда такие уколы работают. Согласно исследованию, опубликованному в журнале Aesthetic Surgery Journal, около 17% из 17 000 пациентов были разочарованы результатом, хотя статистика в целом положительная.

Тут все сложно. Фосфатидилхолин запрещен в ряде европейских стран, потому что процедуры на его основе иногда вызывают серьезные осложнения — отеки, воспаления и даже некроз тканей. Более того, FDA (Американское Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) утверждает, что фосфатидилхолин даже не был одобрен для использования в инъекционной косметологии.

Достоверных данных о том, насколько липолитики безопасны или эффективны, нет. Единственное исследование на эту тему было спонсировано компанией-производителем жиросжигающих препаратов, так что выглядит сомнительно.

В общем, пока совершенно непонятно, куда исчезает жир после расщепления. В теории, продукты распада жировых клеток выводятся из человеческого организма через печень, но точной информации об этом пока нет.

Синди Пирсон, директор Национальной женской сети здравоохранения (некоммерческой группы защиты прав потребителей в США) считает, что FDA должны вмешаться и остановить производство подобных препаратов, пока их безопасность не будет доказана. А врачам стоит убрать инъекционную липосакцию из списка процедур.

Косметологи, конечно, не согласны: сейчас это одна из самых востребованных услуг, особенно в весенне-летний период. Поэтому они предпочитают говорить клиентам, что их препараты сделаны на основе лецитина, который ассоциируется у клиентов с чем-то полезным.

Что в итоге? Наш совет — воздержаться до выяснения обстоятельств. А если хотите избавиться от пары сантиметров — попробуйте спорт, массаж и коррекцию питания, потому что быстрого и безопасного похудения, увы, не бывает.

Узнайте больше по тегам:

Роксана Киселева
Автор-эксперт

Вам будет интересноВам будет интересноВам будет интересноВам будет интересноВам будет интересно

Липолитики — уколы для похудания в Йошкар-Оле

Липолитики — уколы для похудания.

Липолитики – это препараты для коррекции фигуры. Они вводятся под кожу инъекционно (уколами тончайших игл) и позволяют убрать отложения жира на теле. Сама методика называется «липолиз», она призвана не только избавить от жира, но и улучшить состояние кожи, восстановить обмен веществ в тканях.

КАК ДЕЙСТВУЮТ ЛИПОЛИТИКИ?

В нашем организме процессы выработки каких-либо веществ и процессы их распада сбалансированы. Наша жизнь вносит свои коррективы неправильное питание, стрессы, нарушения в работе щитовидной железы. Все это приводит к сбоям. В результате синтез идет быстрее, что приводит к увеличению объема подкожной жировой клетчатки. Коррекция липолитиками – это использование натуральных ферментов и других веществ, которые вводятся тонкими иглами в проблемные зоны и расщепляют жир. Препараты, по сути, – форма фосфатидилхолина, который производится печенью для обеспечения жирового обмена. Если этого фермента в организме мало, то обмен веществ замедляется. Липолитики поднимают уровень фосфатидилхолина и помогают исправить ситуацию.

Основные преимущества липолитиков:
• Быстрый эффект в виде нормализации кровотока, восстановления метаболизма и липидного обмена.
• Возможность корректировать отдельные небольшие зоны, например второй подбородок.
• Позволяют избавиться от целлюлита, уменьшить жировую прослойку на 5-6 см, улучшить состояние кожи.
• С помощью липолитиков можно уменьшить объем живота, убрать складки на боках, очертить талию.
• Минимальный период реабилитации, отсутствие необходимости надолго выпадать из привычной жизни.

Из минусов – болезненность и возможность появления синяков.

Справка! Липолитики предназначены не для общего, а для локального похудения.

Биоревитализация обеспечивает устранение растяжек, обезвоживания и дряблости кожных покровов, а также позволяет убрать морщины гиалуроновой кислотой, которая является основой используемых для процедуры препаратов. Как правило, она выполняется с целью профилактики процесса увядания кожи, для подготовки к пластическим операциям и постоперационной реабилитации.

ПОКАЗАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ

Среди основных показаний:
• второй подбородок;
• лишний жир на шее и плечах;
• очень большие щеки;
• лишний жир на бедрах, животе, ягодицах;
• большой объем жира на тыльной стороне ладоней.

Важно! Липолитики могут улучшить контур лица или убрать локальные отложения. Однако сделать из полного человека стройного они не могут.

ОГРАНИЧЕНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ

Не всем пациентам можно провести курс процедур. Среди противопоказаний:
• возраст до 18 лет;
• беременность и кормление грудью;
• онкология;
• патологии почек и печени;
• эпилепсия;
• эндокринные и ряд аутоиммунных заболеваний;
• нарушение свертываемости крови;
• психические расстройства.
• подробнее все противопоказания подскажет врач на консультации

В КАКИЕ ЧАСТИ ТЕЛА ДЕЛАЮТ ИНЪЕКЦИИ ЛИПОЛИТИКОВ?

Липолитики позволяют скорректировать практически любую зону:
• Лицо. Обычно достаточно 4-5 процедур. В результате лицо худеет, молодеет, повышается упругость кожи, подтягивается контур лица, уменьшается носогубная борозда. Корректируется второй подбородок.
• Живот. Липолитики подтягивают силуэт, сужают талию, корректируют выступающие бока. Важно после процедуры придерживаться правильного образа жизни, потому что даже незначительная прибавка в весе сведет на нет весь результат.
• Ноги. Ноги целесообразно корректировать со всех сторон – комплексно. Однако можно убрать локальные дефекты – нависающую складку над коленями, чрезмерно полные икры. Липолитики позволяют выровнять бедра – как с наружной стороны (убрать «галифе»), так и с внутренней (добиться «правильного» расстояния между ногами), а также устранить с них целлюлит.
• Руки. С помощью липолитиков корректируют шейно-плечевой пояс, плечи, предплечья, убирают лишний жир с тыльной стороны ладоней.
• Ягодицы.. Липолитики делают ягодицы упругими и подтянутыми, кожа становится плотнее, уходит целлюлит, улучшается силуэт фигуры.
• Шея и зона декольте. Здесь обычно скапливается мало жира, поэтому уколы в эти зоны делаются редко.
• Спина. Метод введения липолитиков позволяет убрать отложения жира с поясницы, нависающие складки на лопатках, скорректировать бока.

КАК ПРОВОДИТСЯ ПРОЦЕДУРА?

Специальная подготовка и госпитализация не требуется. Перед процедурой косметолог оценивает состояние здоровья пациента, измеряет объемы тела, чтобы отслеживать эффективность каждой процедуры. После этого индивидуально подбирается препарат и вводится тонкой иглой под кожу в проблемных областях. Глубина введения зависит от специфики липолитика.

ДОСТИГАЕМЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ОТ УКОЛОВ ЛИПОЛИТИКОВ.

Оценку эффективности можно провести уже после первой процедуры. Однако наибольший результат будет заметен после курса. Количество процедур зависит от препарата и варьируется от 3 до 8 с перерывом 8-21 дней.

В результате заметно уменьшаются объемы, улучшается состояние кожи, в зависимости от зоны введения, уходит целлюлит, жировая прослойка уменьшается на 5-6 см, устраняются морщины, улучшаются контуры лица или фигуры.

СХОЖИЕ ПО ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОЦЕДУРЫ

Часто инъекции липолитиков путают с мезотерапией липолитиками. Однако это не одинаковые процедуры.

При мезотерапии глубина прокола – до 6 мм. Этого достаточно, чтобы достать до жировой ткани, но не погрузиться в нее, поэтому воздействие поверхностное. При липолизе иглу вводят на глубину до 3 см.

При этом могут даже использоваться одинаковые препараты для липолиза и мезотерапии. Однако ключевой фактор – это именно глубина введения. Даже очень сильный липолитик не сможет устранить целлюлит и лишние килограммы, если его ввести на глубину 6 мм.

КАК ПРОХОДИТ РЕАБИЛИТАЦИЯ ПОСЛЕ ПРОЦЕДУРЫ?

После процедуры в первое время могут оставаться синяки, отечность, локально повышается температура тела. Период восстановления занимает 2-3 дня. В течение реабилитации нельзя загорать, перегреваться – посещать сауну и баню. Чтобы не замедлить процесс выведения продуктов распада жировых клеток, надо отказаться от алкоголя. Для повышения эффективности липолиза рекомендованы термолифтинг, прессотерапия, LPG-массаж.

Для сохранения результата надолго надо трижды в неделю заниматься спортом и правильно питаться.

ЧТО МОЖНО И НЕЛЬЗЯ ДЕЛАТЬ ПОСЛЕ УКОЛОВ ЛИПОЛИТИКОВ?

• На протяжении недели каждый день нужно выпивать 2-2,5 л воды, чтобы сохранять водный баланс в организме.
• В первые 2-3 дня нельзя пить спиртное.
• Чтобы уменьшить отеки, можно делать сухие холодные компрессы.
• Если процедуры проводились на лице, то нужно перед каждым выходом из дома использовать крем от загара.
• Если липолитики вводились зимой, не стоит долго находиться на холоде.
• В первый день рекомендуется отказаться от декоративной косметики в зонах введения препаратов.

Услуга	Стоимость
Инъекция липолитика Фосфатидилхолин 5% ID-FARMA (Испания) 5,0 мл	1 800.00

Инъекции для сжигания жира / Лазерный Доктор Санкт-Петербург

Локальные жировые отложения — самая настоящая проблема, от которой очень тяжело избавиться. К счастью, тяжело — не значит невозможно. В нашей новой статье мы расскажем о таком необычном способе, как инъекции для сжигания жира. Вы узнаете, что особенного в локальных жировых отложениях, как проходит процедура их устранения, как действуют уколы, какие имеются противопоказания к сеансу.

Уколы, сжигающие жир на животе

Локальными жировыми отложениями называются отдельные скопления подкожного жира, из-за которых нарушаются пропорции тела или лица. А ещё их по-другому называют жировыми ловушками. Основная проблема таких отложений заключается в том, что устранить их практически невозможно: не помогают ни диеты, ни активные физические упражнения. Это связно с тем, что локальные жировые отложения — это, по сути, неприкосновенные запасы питательных веществ, которые организм очень сильно старается не растратить.

Причины и опасность появления жировых ловушек

Объёмы жира начинают возрастать, когда производство адипоцитов начинает преобладать над их расщеплением. Такой дисбаланс могут спровоцировать следующие факторы:

• генетическая предрасположенность;

• привычка плотно ужинать перед сном;

• повышенное содержание в пище углеводов и жиров;

• приём некоторых гормональных препаратов;

• неправильное распределение еды в течение дня: большие порции с большими промежутками между их приёмом;

• нарушения гормонального фона;

• неправильное питание: фастфуд, напитки с большим содержанием сахара;

• сниженная двигательная активность.

При этом одним из самых любимых мест жировых ловушек является живот, что создаёт много эстетических проблем. Например, в пляжный сезон они сильно ограничивают выбор купальника. Да и внешний вид заметно страдает.

Но эстетические изъяны — это не единственная и даже не самая большая проблема «живота». Гораздо опаснее медицинские проблемы. Так, скопление висцерального жира может сдавливать внутренние органы. Это может привести к нарушениям их работы, воспалениям, заболеваниям. Кроме того, возможно развитие атеросклероза, гипертензия, повышение сахара или холестерина. Возрастает риск инфаркта миокарда, инсульта, развития второго типа диабета.

Поэтому становится ясно, что устранение «животика» — необходимость. К сожалению, сделать это непросто. Как говорится, жир из живота уходит в последнюю очередь.

Один из самых эффективных и быстрых способов устранить его — это сделать уколы для сжигания жира на животе.

Уколы от жира на животе

Препараты, вводимые при помощи уколов, называются липолитиками. Собственно, вводятся они не только в живот, но и в другие зоны на теле и даже на лице. В состав липолитиков входят активные вещества, при контакте с которыми разрушается оболочка жировых клеток. В результате жир расщепляется, после чего выводится из организма естественным путём. При этом жиросжигающие уколы в живот являются абсолютно безопасными для других тканей: они не повреждают их, и вообще никак не взаимодействуют с ними.

Сегодня один из самых эффективных и востребованных липолитиков — итальянский препарат Aqualyx (Акваликс).

Уколы в живот от жира: противопоказания

Процедуру не проводят беременным и кормящим женщинам, людям с индивидуальной непереносимостью препарата или его компонентов. Противопоказаниями будут и некоторые болезни: онкологические, хронические острые, болезни кровеносной системы, а также воспаления на коже в области введения липолитиков.

Жиросжигающие уколы: ход процедуры

Чтобы заранее проверить вас на наличие противопоказаний, нужно будет записаться на первичный приём к специалисту. Также на нём врач осмотрит вас, проверит состояние кожи, проконсультирует и расскажет про уколы от жира на животе. Если у вас нет противопоказаний, то сеанс можно будет провести сразу после первичного приёма.

Препарат Aqualyx вводится при помощи стальной иглы Lipoinject. Благодаря тому, что игла тонкая и острая, процедура фактически не сопровождается дискомфортом, что позволяет отказаться от анестетика. Длительность одного сеанса составляет около 25-50 минут.

Эффект от уколов, сжигающих жир на животе, вы увидите сразу: объёмы уменьшатся, скорректируется фигура, талия станет более тонкой. По мере прохождения курса результаты будут улучшаться. Всего для проведения курса понадобится от двух до четырёх сеансов с периодичностью в 3-5 недель. После завершения курса вы получите стойкий и выраженный результат.

В нашей клинике вы можете быть уверены в эффективности процедуры: для её проведения мы используем только оригинальные современные препараты Aqualyx, а все наши специалисты имеют богатый опыт проведения инъекционных процедур.

Жиросжигающие уколы: период реабилитации

В среднем длительность реабилитационного периода составляет от пяти до семи дней. Впрочем, вернуться к привычной жизни можно практически сразу после консультации. Но при этом нужно будет соблюдать все рекомендации врача, которые вы получите по окончании сеанса уколов в живот для сжигания жира.

Уколы липолитика ✔️ правила предосторожности ⭐️ Filler-Shop

Липолитики — это ампулы с составом из фосфатидилхолина, одним из ингредиентов которого являются натуральные ферменты сои, и вспомогательного вещества – дезоксиходата натрия. Первый компонент расщепляет поврежденные жировые клетки, второй – разрушает оболочки адипоцитов, превращая подкожный жир в эмульсию.

Отзывы в интернете говорят как об удачных процедурах, так и не очень. Доверять им или нет — личное решение каждого. В этой статье мы хотим поделиться с вами инофрмацией о том, как работают, кому противопоказаны, чем опасны и вредны уколы липолитика.

Воздействие липолитика на жир – возвращение к норме или угроза для здоровья?

Вот как уколы липолитика в живот, бедра, руки и другие проблемные зоны воздействуют на наш организм:

• Восстанавливают микроциркуляцию крови и лимфы
• Делают кожу гладкой и эластичной, избавляют от целлюлита
• Уменьшают объемы за счет сжигания жира и выведения жидкости
• Нормализуют метаболизм

Главная цель инъекций для похудения – превратить избыточный жир в эмульсию и вывести ее из организма. Основная причина, по которой могут быть опасны уколы липолитика — это то, по назначению ли используют препарат или нет. 

Липолитические инъекции принесут ожидаемый результат в следующих ситуациях:

• Нормальная масса тела или незначительный ее избыток в виде труднодоступных «укромных уголочков» жира
• Ситуация, когда некоторые части тела портят «общий вид» – выпирающий живот, «ушки» на бедрах, отложения в верхней части рук
• Комплексная программа похудения, при которой уколы усиливают эффект от физических тренировок и правильного питания
• Борьба с целлюлитом
• Устранение второго подбородка
• Лечение «вдовьего горба» на шее
• Ликвидация ксантелазмов – холестериновых бляшек на веках
• Незначительное уменьшение объемов тела

Не поможет липолитик при значительном весе, нарушении обмена веществ, несоблюдении диеты, отсутствии физических нагрузок. В таком случае жировые скопления могут просто изменить локацию – например, с живота на бедра. Уколы липолитика принесут вред при гормональных сбоях, когда их может разрешить только врач параллельно с решением основной проблемы и ликвидацией причины избыточной массы тела.

Многих пациентов в данной процедуре волнует вопрос касательного того, возвращается ли жир после липолитиков. Здесь стоит прежде всего сказать, что липолитики — не единственное решение в борьбе с лишним весом. Коррекция тела посредством липолиза даст быстрый видимый эффект. Однако, если вы не будете следить за своим питанием, вести сидячий образ жизни и отказываться от любого вида спорта, то вернетесь на повторную процедуру к косметологу месяца через 2-3.

Как проходит процедура

Шаг 1. Кожный покров дезинфицируют.
Шаг 2. При желании пациента на место предполагаемых инъекций наносится анестетик.
Шаг 3. Далее непосредственно проводятся уколы – при помощи тонкой иглы или канюли. Вся процедура занимает около получаса.
Шаг 4. Повторная дезинфекция.

В зависимости от степени выраженности проблемы и выбранного препарата курс уколов может составлять 5–15 процедур с интервалом 1–2 недели. Расчет количества вводимого препарата совершает врач.

После процедуры пациент отдыхает около 30 минут, во время которых начинается процесс липолиза – расщепления жира на жирные кислоты, после чего клиент возвращается к привычной жизни. На протяжении недели не рекомендуется загорать, заниматься спортом, принимать горячую ванну, посещать баню, сауну, бассейн.

Побочные эффекты

Реабилитационный период после инъекционной методики избавления от жировых отложений длится несколько дней. Неприятные симптомы и последствия, сопровождающие процедуру, следующие:

• Жжение в области инъекций (липолиз – достаточно болезненный процесс, так что болевые ощущения считаются нормой)
• Папулы и небольшие бугорки
• Покраснения, гематомы
• Аллергические реакции
• Кровоизлияния
• Увеличение температуры тела как реакция на разложение жировых клеток
• Фиброз тканей – при неправильном введении препарата (в мышцы вместо подкожно-жировой клетчатки)

Если процедура делается в преддверие пляжного сезона, то следует учитывать, что прямые липолитики могут вызвать осложнения в виде синяков, которые могут оставаться на протяжении всего курса. Таким образом, серию сеансов лучше планировать заранее.

В 1,4% случаев у пациента могут появиться уплотнения в местах проколов, которые сопровождаются зудом и болью. Так проявляется аллергия на липолитики. Но, если при этом резко повышается общая температура тела, то возможно была занесена инфекция при процедуре. А это повод срочно обратиться за квалифицированной помощью.

Противопоказания инъекционной методике удаления жира

• Беременность, кормление ребенка грудью
• Злокачественные опухоли
• Эпилепсия
• Индивидуальная непереносимость ингредиентов препаратов
• Болезни печени и мочеполовой системы
• Сахарный диабет и другие эндокринные недуги
• Склонность к образованию рубцов
• Обострение хронических заболеваний
• Повреждения кожного покрова в местах запланированных уколов
• Варикоз

Чем опасны уколы липолитика, и опасны ли вообще?

Причиной говорить об опасности липолитиков стал тот факт, что в 2011 году во Франции запретили инъекционный липолиз и мезотерапию. Связано это, прежде всего, с осложнениями после процедур, такими как некроз, повреждение подкожных тканей, тромбоз и язвы. Куда девается жир, приносит фосфатидилхолин пользу или вред– эти моменты по сей день остаются невыясненными.

Сейчас встретишь много за и против применения липолитиков косметологами со всего мира. В то же время, если сравнивать липосакцию, которая предполагает хирургическое вмешательство, и малоинвазивный липолиз с помощью уколов, конечно же, последний более безопасен и не требует столь длительного восстановительного периода, нежели удаление избыточного жира хирургическим путем.

Идеальная фигура с липолитиками возможна, если выбрать опытного специалиста, который поможет определить, подходит ли вам данный метод, выберет препарат и дозировку и качественно выполнит процедуру. Важно, чтобы у врача было высшее медицинское образование и сертификат, дающий право на работу с тем или иным препаратом.

Кроме того, пациентам стоит помнить, что успех зависит в наибольшей степени от их самих. Только правильное питание и спорт, а инъекции им в подкрепление, помогут добиться желаемых результатов.

Липолитики – уколы для похудения

Уколы липолитики при инъекционном введении в проблемные зоны активно расщепляют жировые отложения и способствуют их естественному выведению из организма. Так или иначе, с проблемой лишних килограммов и сантиметров сталкиваются даже те, чья фигура близка к идеалу: ни изнуряющие диеты, ни занятия в спортзале не могут избавить наш организм от так называемых жировых ловушек. Они представляют собой локальные подкожно-жировые отложения, формирующие характерные выпуклости в различных частях тела.

Жировые ловушки способны испортить очертания даже идеального силуэта: локализуясь в области шеи, подбородка, предплечий, живота, бедер и коленей, они практически не поддаются воздействию традиционных методов коррекции фигуры. При этом соотношение роста и веса, а также количество мышечной массы человека вполне может иметь нормальные показатели. Одним из самых эффективных способов избавиться от локальных отложений в такой ситуации становятся жиросжигатели. Данные уколы для похудения применяются для коррекции следующих зон:

• веки
• область шеи и второго подбородка
• живот
• ягодицы
• внешняя и внутренняя поверхность бедер
• бока
• плечи и предплечья
• область суставов
• зона над коленями

Нельзя не отметить, что препараты липолитики для похудения эффективны и против целлюлита – эстетического недостатка, вызванного нарушением обменных процессов в подкожно-жировой клетчатке и застоем лимфы.

Липолитики для лица

Косметические липолитические уколы для лица применяются при следующих показаниях:

• неровный овал лица
• появление второго подбородка
• дефекты области носа
• избыточные жировые отложения на щеках
• жировые скопления в районе глаз

Липолитик вводится в подкожную клетчатку с помощью тончайших атравматичных игл. Глубина уколов определяется индивидуально, она зависит от типа кожи пациента и от того, какая часть лица корректируется. Длительность процедуры составляет около 20 минут.

Липолитики в подбородок

Наиболее эффективными препаратами, выступающими липолитиками при коррекции подбородка, являются коктейли, чье действие основано на преобразовании жировых отложений в эмульсию, легко выводимую из организма, а так же коктейли из витаминов и аминокислот, обеспечивающие двойной эффект: жиросжигание и омоложение кожи.

Расщепление жира с помощью данных препаратов осуществляется за несколько процедур. Все зависит от объемов, которые необходимо убрать, с одними можно справится уже с 2-х сеансов, а некоторые требуют от 5 посещений косметолога.

Липолитики в щёки

Область щёк на лице наиболее подвержена старению и скоплению лишних жиров. Однако липолитические процедуры не всегда быстро и эффективно удаляют все проблемные жировые отложения. Иногда для этих целей используются не липотики, а контурную пластику, которая меняет визуально очертания лица, делая его стройнее и скульптурнее.

Липолитики для живота

Для коррекции жировых отложений живота используется локальная мезотерапия — введение липолитических препаратов в конкретные проблемные зоны. Вместе с борьбой с лишними жирами, процедура помогает разгладить линии живота, убрать целлюлит и растяжки, повысить тонус кожи и вернуть ей эластичность. Эффект похудения от косметических инъекций в живот проявляется уже через 1 неделю после первого сеанса мезотерапии. Во время лечения не рекомендуется употреблять алкогольные напитки, ходить в баню и посещать солярий.

Описание метода и его преимуществ

Механизм действия всех уколов-липолитиков одинаков: после введения препаратов в соответствующей зоне активизируется процесс липолиза – распада жиров на жирные кислоты и другие элементы. Для того чтобы продукты распада не вернулись в свое первоначальное состояние, в составе уколов для похудения есть вещества, стимулирующие процесс выведения составляющих жировых отложений с помощью кровеносной и лимфатической системы, а также активизирующие микроциркуляцию крови конкретного участка тела. Таким образом, жиросжигатели для похудения оказывают разнонаправленное воздействие:

• ускоряют обменные процессы в тканях
• восстанавливают липидный обмен в корректируемой зоне
• активно расщепляют жиры на безопасные вещества, выводящиеся из организма естественным путем
• регулируют метаболизм
• нормализуют кровообращение и лимфоток

Однако уколы для похудения отлично справляются с жировыми ловушками и на данных участках тела, позволяя женщинам без труда усовершенствовать силуэт и овал лица. Кроме того, к достоинствам липолитиков относятся следующие:

• Возможность коррекции конкретной проблемной зоны. Инъекции липолитиков позволяют уменьшить объемы именно там, где это необходимо.
• Мгновенный результат. Эффект от использования жиросжигателей заметен через 2 недели после введения: сначала после процедуры возможен отек, а после того как он сходит, объемы в корректируемой области уменьшаются на несколько сантиметров по сравнению с теми, которые были до процедуры.
• Период реабилитации минимален. Сама процедура введения уколов для похудения занимает менее часа. В течение 1-2 недель возможна отечность и синячки, поэтому не стоит планировать посещение пляжа 2 недели после процедуры. В течение недели после процедуры рекомендуется носить утягивающее белье для усиления эффективности.
• Пролонгированный эффект. Разрушенные жировые отложения не возвращаются в течение длительного времени.

Описание процедуры

В косметологической клинике «Ego Estetic®» г. Краснодара липолитики для тела и лица применяются только после консультации с врачом — дерматокосметологом и сбора подробного анамнеза, призванного исключить возможные противопоказания к проведению процедуры и выявить индивидуальные особенности организма пациента. Кроме того, во время первичного приема врач осуществляет замеры объемов тела пациента и определяет наиболее проблемные зоны силуэта, нуждающиеся в коррекции. Самостоятельно пациент, как правило, легко может оценить результаты по тому, как сидят на нем или на ней узкие до этого брюки.

Видео Липолитики:

Уколы для похудения, именуемые жиросжигателями, не требуют никакой специальной подготовки. Препарат вводится тонкой атравматичной иглой в подкожно-жировую клетчатку и это не доставляет болезненных ощущений, так как нервные клетки не имеют нервных окончаний.

После процедуры пациенту рекомендуется надеть утягивающее белье и пить в течение недели как минимум на 500 мл больше воды в сутки, чем обычно. Вода облегчит вывод расщепленного жира из организма. В первую неделю после применения липолитиков косметологи рекомендуют воздержаться от физических нагрузок, принятия горячих ванн, а также от посещения солярия и бани.

Противопоказания

• Беременность или лактация
• Локальная или системная инфекция в период проведения процедур
• Психические расстройства, неспособность понять протокол процедуры или «Информированное согласие»
• Нарушение свертываемости крови
• Аутоиммунные заболевания
• Нарушение кровообращения в конечностях
• Хронические или острые заболевания печени
• Почечная недостаточность
• Ожирение (ИМТ > 30)
• Диабет I типа
• Декомпрессированный диабет II типа
• Болезни сердца
• Аллергические реакции на лидокаин и его производные, атопия или сильные аллергические реакции

Видео Липолитики:

Побочные явления

• Жжение (кратковременно сразу после процедуры)
• Зуд (кратковременно)
• Покраснение (несколько часов)
• Жар в области инъекции (несколько часов)
• Отеки (несколько дней)
• Гематомы (несколько дней)
• В редких случаях в первые дни после инъекций может возникнуть неровный контур поверхности кожи, который в течении 10-15 дней проходит самостоятельно

Липолитики цены
Липолитики отзывы

липолитики для сжигания жира на животе — Свердловская областная общественная организация ветеранов войны, труда, боевых действий, государственной службы, пенсионеров

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Делая выбор в пользу АСЖ-35, не забывайте о физической активности. По моим наблюдениям, комбинация натурального комплекса с занятиями в зале, пробежками, утренней зарядкой или пешими прогулками помогает добиться снижения веса за более короткий промежуток времени, чем без активного образа жизни. Я рекомендую коктейль для сжигания жиров на основе клетчатки как эффективный метод похудения. Где купить липолитики для сжигания жира на животе? В инструкции по применению активатора расписаны варианты суточного рациона и правила приготовления коктейля, для достижения заметных результатов в похудении. Средство рекомендуется растворять в кисломолочных продуктах или частой воде, принимая по 1 порции на завтрак, 1,5 порции во время обеда и ½ порции вместе с ужином. Такая схема позволяет своевременно сжигать калории и жиры, отложившиеся в подкожных соях, а также уменьшать объем порций, что дополнительно простимулирует организм к похудению. Дело в том, что средство заполняет желудок создавая ощущения сытости, так что вы не испытаете дискомфорт и голод при минимальном количестве пищи.
Содержание: Что такое липолитики для похудения? ⇩. Принцип действия липолитиков ⇩. Отзывы о действии липолитиков ⇩. Виды липолитиков ⇩. Использование липолитиков для похудения ⇩. Для живота ⇩. Для тела ⇩. Для лица ⇩. Понятие и методика липотической и. Что представляют собой липолитики для похудения живота и отзывы пациентов. Обзор популярных препаратов, их принцип . Компоненты, входящие в состав препаратов, избавляют от сумки на животе и растяжек, возвращая коже упругость и здоровый вид. Содержание статьи: Общие сведения. Липолитики – это инъекционные препараты, используемые для устранения подкожных жировых отложений. Средства не устраняют причину появления лишнего веса, а только оказывают временное косметическое действие в зоне введения состава. Для достижения желаемого результата требуется совмещать. Что такое липолитики для живота и как они действуют? . Игла вводиться в места скопления жира на глубину не менее 1-1,5см. . Действие липолитиков в области живота направлено на устранение подкожного жира и увеличение эластичности кожных покровов. После использования процедуры исчезает дряблость. Я колю только живот (точнее низ живота), это 1 зона. Для многих женщин и даже мужчин жирок внизу живота — это . Липолитики. Это для совсем ленивых. Ответить Отмена. . Жир на животе-это то, что мы едим. Тут нужно корректировать питание. И чаще 3 раз в неделю его нет смысла качать. живот и бока. Чаще всего липолитики используются для устранения жира в области . Отзывы с фото живота до и после липолитиков для похудения, а также других . При этом у них может быть жир на животе и например в области коленей. Если такая женщина начнет в общем худеть, то она и в других местах. Липолитики – препараты для коррекции фигуры. Инъекции липолитиков помогают убрать жировые отложения в проблемных . Они вводятся под кожу инъекционно (уколами тончайших игл) и позволяют убрать отложения жира на животе, бедрах, лице, шее, руках, в зоне декольте. Сама методика называется. Инъекционные липолитики – это эффективные препараты, которые вводятся под кожу и запускают процесс локального липолиза (активного сжигания . Особенно это касается живота и талии, откуда жир зачастую уходит в последнюю очередь. Липолитики способны за короткие процедуры убрать лишний жир с области живота, второго подбородка и даже лица, но с побочными эффектами. . Реальность и вред от липолитиков для похудения. Липолитики – это натуральный фермент сои. Такой препарат еще известен как лецитин (пищевая добавка), даже.
http://sammal.ru//clubs/17_aszh-35-v-novoshahtinske-464570.html
http://www.sitrak.info/posts/85293-kupit-aszh-35-v-schelkovo.html
https://jumik.ru/posts/24145-aktivator-szhiganija-zhira-v-nazrani.html
https://www.fuckweb.ru/posts/60114-aktivator-szhiganija-zhira-v-nazrani.html
https://www.fuckweb.ru/posts/60114-aktivator-szhiganija-zhira-v-nazrani.html
В инструкции по применению активатора расписаны варианты суточного рациона и правила приготовления коктейля, для достижения заметных результатов в похудении. Средство рекомендуется растворять в кисломолочных продуктах или частой воде, принимая по 1 порции на завтрак, 1,5 порции во время обеда и ½ порции вместе с ужином. Такая схема позволяет своевременно сжигать калории и жиры, отложившиеся в подкожных соях, а также уменьшать объем порций, что дополнительно простимулирует организм к похудению. Дело в том, что средство заполняет желудок создавая ощущения сытости, так что вы не испытаете дискомфорт и голод при минимальном количестве пищи.
липолитики для сжигания жира на животе.
Когда человек твердо решил привести свою фигуру в порядок, на помощь ему придут фитнес-тренеры или диетологи, но основной вклад делает сам худеющий, ведь только с помощью силы воли можно изменить собственные пищевые и жизненные привычки так, чтобы лишний жир начал таять. Задача эта сложная, поэтому случаются срывы, подрывающие веру в себя, порождающие чувство стыда и комплексы. Активатор сжигания жира АСЖ 35 поможет избавиться от лишнего веса легко и уверенно, дополняя комплекс предпринятых для похудения мер. Об этом говорят многочисленные положительные отзывы.
Силовые упражнения для быстрого сжигания жира подходят как женщинам, так и мужчинам, но нагрузки должны быть разными. Девушкам следует брать гантели весом в 1-1,5 кг, а мужчинам – в зависимости от их физической подготовки. Если тренировка происходит дома, и у спортсмена нет подходящих. Выполняем лучшие упражнения, сжигающие жир – 20 минут в день. Выполняйте упражнения, сжигающие жир, с минимальной передышкой между ними. Всего нужно выполнить 3 подхода. Отдыхайте по 30-60 секунд между подходами. 10 самых эффективных видов тренинга для сжигания жира. Вы сможете выбрать любую тренировку на свой вкус . Не стоит думать, что йога — это тренировка для ленивых, которая предназначена только для дней активного отдыха. Как бы мы правильно ни питались, если в вашей жизни не хватает движения — похудеть будет непросто! Даже если вы употребляете какие-то жиросжигающие добавки или сидите на диете. Силовая тренировка для сжигания жира всегда дает хорошие результаты. Для усиления эффекта можно по окончании тренировки употреблять немного протеина. Рассмотрим пример силового упражнения на жиросжигание для проработки рук и нижней части тела: Выпады с гантелями. Ступни на ширине плеч. Какие кардио-упражнения сжигают жир? Первая часть тренировки, направленной на сжигание жира, состоит из . Езда на велосипеде, а также занятия на велотренажёре способствуют активному сжиганию жира в области живота так как, во-первых, при выполнении этого упражнения активно. — Упражнения, которые работают на сжигание жира — это, как правило, функциональные упражнения. Хотя жир сжигается и при силовых нагрузках. Лучше всего делать комплекс упражнений силовых, после которых выполнять еще кардио работу. Неважно, бег это будет или нет. Конечно, бег считается. Для сжигания жира тренера рекомендуют совмещать аэробные и анаэробные упражнения. Кардио способствует сжиганию жира, а силовые тренируют мышцы и делают фигуру точеной. Есть два варианта совмещения таких нагрузок Упражнения для эффективного сжигания жира в домашних условиях. Как сжечь подкожный жир в домашних условиях. . Существует несколько базовых упражнений с гирей, которые вы легко можете делать дома и сжигать лишние калории. Например, поднимать и опускать гирю между ногами, выписывая восьмерки. 13. Чтобы успешно сжигать жир, не затягивайте отдых между подходами более 1 мин. Если вы не успеваете восстанавливаться, то можете . Недостаток сна снижает уровень гормона роста, что замедляет обмен веществ, а значит и сжигание жира. Ученые считают, что человеку необходимо не менее 7-8 часов в день.

Липолитики для похудения в живот, нос, для лица

Мезотерапия и липолитики

• Омолаживающий мезококтейль – лицо

  2800 1960 руб

• Омолаживающий мезококтейль – лицо, шея

  3400 2380 руб

• Омолаживающий мезококтейль – лицо, шея, декольте

  3700 2590 руб

• Омолаживающий мезококтейль – волосистая часть головы

  3300 2310 руб

• Коррекция второго подбородка

  2500 руб

• Липолитическая терапия 5 мл

  2500 руб

• Липолитическая терапия 8 мл

  4000 руб

• Липолитическая терапия 10 мл

  4500 руб

• Липолитическая терапия 12 мл

  5500 руб

• Липолитическая терапия 15 мл

  6000 руб

• Липолитическая терапия 16 мл

  6500 руб

• Липолитическая терапия 20 мл

  7500 руб

• МЭЛСМОН 2 мл (Япония)

  4500 руб

• МЭЛСМОН 4 мл (Япония)

  6500 руб

Описание

Липолитические препараты содержат активные компоненты, которые стимулируют кровообращение и способствуют выведение продуктов распада. Курс липолитической терапии возможно применять не только в области лица, но и в области живота, бедер, рук, ног, ягодиц. Курс может состоять из 1-4 процедур, или быть более длительным. Для более интенсивного липолитического эффекта часто используют комбинацию с массажем и косметическими процедурами. Продолжительность и интенсивность лечения устанавливается врачом и может быть скорректирована в процессе.

Акция на мезотерапию

до 31 июля 2021

Скидка 30% на мезотерапию лица, шеи, декольте, рук, головы. Акция ограничена по времени до 31 июля.

Показания к использованию липолитиков

• наличие второго подбородка;
• жировые отложения в области шеи;
• объемные запасы жира в области живота;
• лишние сантиметры в области бедер и ягодиц;
• наличие целлюлита;
• излишние жировые отложения на руках;
• коррекция фигуры после значительного похудения;
• в качестве дополнительной косметологической процедуры при подтяжке шеи и лица.

Фотографии нашей косметологии

Преимущества применения липолитиков

• 1. Локальное воздействие именно в тех местах, где это необходимо.
• 2. Возможность комбинировать липолитические препараты с мезотерапией.
• 3. Заметный результат уже после первых процедур.
• 4. Улучшение состояния кожи, избавление от выраженного целлюлита.

Липолитики для похудения: возможно ли это

Профессиональное применение липолитиков очень эффективно: жировой слой уменьшается примерно на 5-6 см, однако подход к похудению должен быть комплексным. Инъекции с липолитическими препаратами — прекрасная альтернатива процедуре липосакции, особенно в тех случаях, когда оперативное вмешательство исключено по ряду причин.

Липолитики для похудения помогают нейтрализовать жировые отложения в местах, в которых сложно использовать другие методы (например, липолитики в живот). Даже стройные женщины часто страдают от наличия жировых отложений в области живота.

Именно зона живота является проблемной с точки зрения коррекции. Липолитики в живот – отличный метод коррекции, который должен сочетаться с другими косметическими и общетонизирующими процедурами, массажем и физической нагрузкой. Анализ результатов показывает, что оптимальный эффект достигается, если используются комбинированные методы лечения.

Пример действия липолитиков

Виды липолитиков

Препараты для липотерапии делятся на две основные группы. Прямые липолитики – биологически активные вещества на основе лецитина, который способен в непрерывном режиме расщеплять жировые клетки, не провоцируя при этом аллергических реакций. Такие препараты лучше всего подходят для борьбы с большим количеством жира. Вторая группа – непрямые липолитики на основе кофе, артишоков и других натуральных ингредиентов. Они помогают убрать невыраженные жировые отложения и вывести из организма токсины и шлаки. Непрямые липолитики больше подходят для устранения косметических несовершенств: дряблости, неровности кожи, растяжек.

Инъекционный липолиз: этапы проведения

• 1. Подготовительный этап. Косметолог собирает анамнез пациента, уточняет особенности питания, образа жизни, привычки. Обязательно выясняет как давно испортилась фигура. Врач рассказывает, как действуют липолитики, а также предупреждает о возможных реакциях. Назначается дозировка препаратов и отмечается зона уколов.
• 2. Дезинфекция области вмешательства и непосредственное введение инъекций, содержащих липолитические препараты. Процедура может быть болезненной, поэтому допускается использование местной анастезии: крем или гель с обезболивающим эффектом, а также добавление анастетика в липолитическую инъекцию. Липолитический коктейль вводится в подкожный слой с помощью микроиглы на глубину до 1,5 см. Средняя продолжительность процедуры — около 20 минут. Обычно процедура переносится пациентами легко и не вызывает осложнений.
• 3. Заключительный этап. После введения липолитиков на кожу наносится успокаивающий крем. Пациенту рекомендуют получасовой отдых и обильное питье для активного расщепления жиров.

Липолитики для лица

Современная косметология успешно использует липотерапию для устранения эстетических несовершенств лица. Липолитики для лица – чудесное средство, помогающее изменить внешность в лучшую сторону. Липолитики в щеки помогают избавиться от лишней жировой ткани и «подчеркнуть» скулы, улучшить микроциркуляцию, увеличить отток лимфы. Все это улучшает цвет лица и повышает тонус кожи.

Липотерапия для подбородка направлена на коррекцию овала и подтяжку лица. Липолитики в нос – процедура, благодаря которой меняется форма носа: он приобретает четкие контуры, выравнивается рельеф, исчезает бугристость.

«Клиника ЦЕЛЬСИУМ» предлагает своим клиентам курс липолитиков по доступной цене от профессиональных и опытных косметологов. Липотерапия – безопасное и эффективное средство для коррекции фигуры, улучшения состояния кожи и моделирования лица.

Специалисты по направлению

Ответы на частые вопросы от пациентов

Прочие услуги

Что такое липолиз?

Пищеварительный липолиз или расщепление пищевых жиров

Эта форма липолиза расщепляет пищевые жиры , то есть те, которые мы потребляем, когда едим. Подавляющее большинство из них — это триглицеридов , сложные липиды, которые слишком велики для того, чтобы неповрежденно всасываться в кишечнике. Когда они попадают в кишечник, их необходимо сделать усвояемыми: отсюда они попадают в кровоток.

Переваривание пищевых жиров инициируется в желудке желудочной липазой .Липазы — это ферменты, «расщепляющие жир». В желудке они эмульгируют триглицериды для производства более мелких липидов (в первую очередь моноглицеридов и диглицеридов).

Производство моноглицеридов затем запускает синтез панкреатической липазы . Он действует в тонком кишечнике, расщепляя 75% попавших в организм триглицеридов. Также в тонком кишечнике вступают в действие желчные кислоты (содержащиеся в желчи). Эти кислоты, секретируемые печенью и хранящиеся в желчных пузырьках, способствуют перевариванию больших липидов, превращая их в маленькие капельки.После переваривания посредством этого совместного действия липазы / желчной соли липиды всасываются через слизистую оболочку кишечника. Любые излишки пищевых жиров хранятся в виде триглицеридов в адипоцитах. Этот процесс называется сильным> липогенезом.

В условиях физических упражнений липолиз адипоцитов устраняет жиры, хранящиеся в жировой ткани

Адипоциты — это специализированные жировые накапливающие клетки: они составляют основной запас энергии в организме. Кластеры адипоцитов образуют жировой ткани , которая находится в разных пропорциях и в разных участках тела в зависимости от человека.У мужчин в основном жировая ткань вокруг живота, тогда как у большинства женщин она находится на бедрах, ягодицах, животе и груди. Избыточный жир вызывает форму целлюлита, ответственного за печально известную «апельсиновую корку».

Липолиз адипоцитов происходит, когда организму требуется энергия (во время упражнений или голодания …) и не может получить ее непосредственно из пищи.

В этом случае организм излучает различных гормональных сигналов (адреналин, норадреналин, кортизол, грелин…), запускающего метаболический каскад, который завершается мобилизацией … тех же липаз! Они расщепляют триглицериды, присутствующие в адипоцитах, высвобождая глицерин, жирные кислоты и … энергию. Глицерин выводится преимущественно почками. Что касается жирных кислот, они могут либо расщепляться в митохондриях клеток для производства энергии (бета-окисление), либо, когда они присутствуют в избыточных количествах, они также могут использоваться для производства кетоновых тел в печени. Это источник энергии для мозга при недостатке глюкозы.Длительное голодание увеличивает выработку кетоновых тел, а в избытке они токсичны. Поэтому разумно поститься только под присмотром.

Как можно ускорить липолиз, чтобы сжечь жир и помочь похудеть?

Чтобы сжечь жир, накопленный в жировой ткани, чтобы похудеть и похудеть, вам нужно затратить больше энергии. Есть несколько естественных и эффективных способов сделать это.

• Устойчивая физическая активность связана с повышенным производством адреналина и норадреналина, что приводит к мобилизации запасов глюкозы (гликоген в мышцах и печени) и жира (триглицериды жиров).Возникающие в результате гипергликемия и липолиз дают энергию, которая может напрямую использоваться телом во время упражнений. Более того, упражнения способствуют снижению уровня инсулина, чтобы обеспечить стабильный уровень сахара в крови и обеспечение энергией. Чтобы максимизировать мобилизацию жиров, важно уделять первоочередное внимание регулярным и продолжительным упражнениям!
• Прерывистое или периодическое голодание — это более мягкая форма более строгих ограничений в питании, которая может оказаться чрезмерно сложной. Прерывистое голодание предполагает отказ от еды в течение 16 часов.Чаще всего его применяют между (ранним) ужином и обедом, пропуская завтрак, хотя в качестве альтернативы можно в равной степени пропустить любое из двух основных приемов пищи в день. Считается, что эта форма ограничения калорий может активировать группу ферментов, называемых сиртуинов , которые могут положительно влиять на липолиз.
• Некоторые пищевые добавки также очень эффективны для активации липолиза, особенно те, которые содержат зеленый кофе (экстракт зеленого кофе) или морингу (органический экстракт листьев моринги).

Итак, теперь у вас есть полный набор возможностей для сжигания лишнего жира и достижения триммерной фигуры!

использование телесного жира вместо углеводов в качестве топлива

Сжигание жира — очень популярный и часто используемый термин среди спортсменов на выносливость. Но действительно ли важно сжигать жир — и если да, то как этого лучше всего достичь? Профессор Аскер Йеукендруп смотрит на то, что говорится в исследовании

Термин «сжигание жира» относится к способности окислять (или сжигать) жир и, таким образом, использовать жир вместо углеводов в качестве топлива.Сжигание жира часто связано с потерей веса, уменьшением жировых отложений и увеличением мышечной массы, и все это может быть полезно для спортсмена.

Известно, что хорошо тренированные спортсмены на выносливость обладают повышенной способностью окислять жирные кислоты. Это позволяет им использовать жир в качестве топлива, когда их запасы углеводов становятся ограниченными. Напротив, у пациентов с ожирением, инсулинорезистентностью и диабетом II типа может быть нарушена способность окислять жир. В результате жирные кислоты могут накапливаться в их мышцах и других тканях.Это накопление липидов и их метаболитов в мышцах может мешать инсулино-сигнальному каскаду и вызывать инсулинорезистентность. Поэтому важно понимать факторы, регулирующие метаболизм жиров, и способы увеличения окисления жиров у пациентов и спортсменов.

Окисление жира во время тренировки

Жиры хранятся в основном в (подкожной) жировой ткани, но у нас также есть небольшие запасы в самой мышце (внутримышечные триглицериды). В начале тренировки нейрональная (бета-адренергическая) стимуляция увеличивает липолиз (расщепление жиров на жирные кислоты и глицерин) в жировой ткани и мышцах.Катехоламины, такие как адреналин и норадреналин, также могут повышаться и способствовать стимуляции липолиза.

Как только начинается тренировка, жирные кислоты мобилизуются. Жирные кислоты жировой ткани должны транспортироваться от жировой клетки к мышцам, транспортироваться через мышечную мембрану, а затем транспортироваться через митохондриальную мембрану для окисления. Триглицериды, хранящиеся в мышцах, подвергаются аналогичному липолизу, и эти жирные кислоты также могут транспортироваться в митохондрии.Во время упражнений используется смесь жирных кислот, полученных из адипоцитов и внутримышечных запасов. Имеются данные, свидетельствующие о том, что тренированные люди накапливают больше внутримышечного жира и используют его больше в качестве источника энергии во время упражнений (1).

Окисление жиров регулируется на разных этапах этого процесса. На липолиз влияют многие факторы, но в основном он регулируется гормонами (стимулируется катехоламинами и ингибируется инсулином). Транспорт жирных кислот также зависит от кровоснабжения жировой и мышечной тканей, а также от поглощения жирных кислот мышцами и митохондриями.Подавляя мобилизацию жирных кислот или транспорт этих жирных кислот, мы можем снизить метаболизм жиров. Однако есть ли способы, которыми мы можем стимулировать эти шаги
и способствовать метаболизму жиров?

Факторы, влияющие на окисление жиров

Интенсивность упражнений — Одним из наиболее важных факторов, определяющих скорость окисления жиров во время упражнений, является интенсивность. Хотя в нескольких исследованиях описана взаимосвязь между интенсивностью упражнений и окислением жиров, только недавно эта взаимосвязь была изучена в широком диапазоне интенсивности (2).В абсолютном выражении окисление углеводов увеличивается пропорционально интенсивности упражнений, тогда как скорость окисления жиров сначала увеличивается, но снова снижается при более высокой интенсивности упражнений (см. Рисунок 1). Итак, хотя часто утверждается, что для окисления жира вам нужно выполнять упражнения с низкой интенсивностью, это не всегда так.

В серии недавних исследований мы определили интенсивность упражнений, при которой наблюдается максимальное окисление жира
, называемая «Fatmax». В группе тренированных людей было обнаружено, что упражнения средней интенсивности (62-63% от VO2max или 70-75% от HRmax) были оптимальной интенсивностью для окисления жира, тогда как для менее тренированных людей она составляла около 50% от
VO2max. (2,3).

Однако различия между индивидуумами очень велики. Тренированный человек может иметь максимальное окисление жира на уровне 70% VO2max или 45% VO2max, и единственный способ действительно выяснить это — выполнить один из этих тестов Fatmax в лаборатории. Однако на самом деле точная интенсивность пиков окисления жира может не иметь большого значения, потому что в пределах 5-10% от этой интенсивности (или 10-15 ударов в минуту) окисление жиров будет столь же высоким, и только тогда, когда интенсивность 20% или около того выше, окисление жиров быстро снизится (см. рисунок 1).

Эта интенсивность упражнений (Fatmax) или «зона» может иметь значение для программ похудания, программ упражнений, связанных со здоровьем, и тренировок на выносливость. Однако проведено очень мало исследований. Недавно мы использовали эту интенсивность в тренировочном исследовании с участием людей с ожирением. По сравнению с интервальными тренировками их окисление жира (и чувствительность к инсулину) улучшилось больше после четырех недель устойчивых упражнений (три раза в неделю) с интенсивностью, равной их индивидуальному Fatmax (4).

Диетические эффекты — Другой важный фактор — диета. Диета с высоким содержанием углеводов подавит окисление жиров, а диета с низким содержанием углеводов приведет к высокой скорости окисления жиров. Употребление углеводов за несколько часов до тренировки повысит уровень инсулина и впоследствии подавит окисление жиров до 35% (5) или около того. Этот эффект инсулина на окисление жиров может длиться от шести до восьми часов после еды, а это означает, что самая высокая скорость окисления жиров может быть достигнута после ночного голодания.

Спортсмены на выносливость часто использовали упражнения без завтрака, чтобы увеличить окислительную способность мышц. Недавно в Левенском университете в Бельгии было проведено исследование, в ходе которого ученые изучали эффект шестинедельной программы тренировок на выносливость, проводимой три дня в неделю, каждое занятие продолжалось от одного до двух часов (6). Участники тренировались либо натощак, либо на углеводном питании.

Когда тренировки проводились натощак, исследователи наблюдали снижение использования мышцами гликогена
, в то время как активность различных белков, участвующих в метаболизме жиров, увеличивалась.Однако окисление жиров во время упражнений было одинаковым в двух группах. Однако возможно, что после тренировки натощак в метаболизме жиров происходят небольшие, но значительные изменения; но в этом исследовании изменения в окислении жиров могли быть замаскированы тем фактом, что эти субъекты получали углеводы во время экспериментальных испытаний. Также следует отметить, что тренировки после ночного голодания могут снизить вашу физическую работоспособность и поэтому могут подходить только для тренировок с низкой или средней интенсивностью.Эффективность таких тренировок для снижения веса также неизвестна.

Продолжительность упражнений — Давно установлено, что окисление становится все более важным по мере выполнения упражнений. Во время упражнений на сверхвысокую выносливость окисление жиров может достигать пика в 1 грамм в минуту, хотя (как указано в разделе «Эффекты питания») окисление жиров может быть уменьшено, если углеводы попадают в организм до или во время тренировки. Что касается похудания, продолжительность упражнений может быть одним из ключевых факторов, так как это также самый эффективный способ увеличить расход энергии.

Режим упражнений — Режим упражнений также влияет на окисление жиров. Было показано, что окисление жиров выше при заданном потреблении кислорода во время ходьбы и бега по сравнению с ездой на велосипеде (7). Причина этого не известна, но было высказано предположение, что это связано с большей выходной мощностью на мышечное волокно при езде на велосипеде по сравнению с бегом.

Гендерные различия — Хотя некоторые исследования в литературе не обнаружили гендерных различий в метаболизме, большинство исследований в настоящее время указывают на более высокую скорость окисления жиров у женщин.В исследовании, в котором сравнивались 150 мужчин и 150 женщин в широком диапазоне интенсивности упражнений, было показано, что у женщин была более высокая скорость окисления жира во всем диапазоне интенсивности, а пиковое окисление жира достигало немного более высокой интенсивности (8 ). Однако различия невелики и могут не иметь никакого физиологического значения.

Пищевые добавки

На рынке есть много пищевых добавок, которые утверждают, что они увеличивают окисление жиров. Эти добавки включают кофеин, карнитин, гидроксицитриновую кислоту (HCA), хром, конъюгированную линолевую кислоту (CLA), гуарану, аурантийский цитрус, азиатский женьшень, кайенский перец, колеус форсхолий, глюкоманнан, зеленый чай, псиллиум и пируват.За некоторыми исключениями мало доказательств того, что эти добавки, которые продаются как сжигатели жира, на самом деле увеличивают окисление жиров во время упражнений (см. Таблицу 1).

Однако одним из немногих исключений могут быть экстракты зеленого чая. Недавно мы обнаружили, что экстракты зеленого чая увеличивают окисление жиров во время упражнений примерно на 20% (4). Механизмы этого недостаточно изучены, но вполне вероятно, что активный ингредиент зеленого чая, называемый галлатом эпигаллокатехина (EGCG — мощный полифенол с антиоксидантными свойствами), ингибирует фермент
катехол-O-метилтрансферазу (COMT), который отвечает за распад норадреналина.Это, в свою очередь, может привести к более высоким концентрациям норадреналина и стимуляции липолиза, делая больше жирных кислот доступными для окисления.

Окружающая среда — Условия окружающей среды также могут влиять на тип используемого топлива. Известно, что упражнения в жаркой среде увеличивают использование гликогена и уменьшают окисление жиров, и нечто подобное можно наблюдать на большой высоте. Точно так же, когда очень холодно, и особенно при дрожи, углеводный обмен, по-видимому, стимулируется за счет метаболизма жиров.

Физическая подготовка

В настоящее время единственный проверенный способ увеличить окисление жиров во время упражнений — это регулярные физические нагрузки. Физические упражнения активируют ферменты путей окисления жиров, увеличивают митохондриальную массу, увеличивают кровоток и т. Д., Все это способствует более высокому уровню окисления жиров.

Исследования показали, что всего четыре недели регулярных упражнений (3 раза в неделю по
30-60 минут) могут увеличить скорость окисления жиров и вызвать благоприятные ферментативные изменения (10).Однако имеется слишком мало информации, чтобы делать какие-либо выводы об оптимальной программе тренировок для достижения этих эффектов.
В одном исследовании мы исследовали максимальную скорость окисления жиров у 300 субъектов с различным уровнем физической подготовки. В этом исследовании участвовали люди с ожирением и малоподвижный образ жизни, а также профессиональные велосипедисты (9). VO2max составлял от 20,9 до 82,4 мл / кг / мин. Интересно, что хотя существует корреляция между максимальным окислением жира и максимальным потреблением кислорода, на индивидуальном уровне физическая подготовка не может использоваться для прогнозирования окисления жира.Это означает, что есть люди с ожирением, у которых скорость окисления жира сравнима с показателями профессиональных велосипедистов (см. Рисунок 2)! Значительные межиндивидуальные различия связаны с такими факторами, как диета и пол, но остаются в значительной степени необъяснимыми.

Программы упражнений для похудания

Сжигание жира часто связано с потерей веса, уменьшением жировых отложений и увеличением мышечной массы. Однако следует отметить, что таких изменений массы тела и состава тела можно добиться только при отрицательном энергетическом балансе: вы должны есть меньше калорий, чем расходуете, независимо от используемого топлива! Оптимальный тип, интенсивность и продолжительность упражнений для похудения все еще не ясны.Текущие рекомендации в основном сосредоточены на увеличении расхода энергии и увеличении объемов упражнений. Поиск оптимальной интенсивности окисления жира может помочь в похудании (потере жира) и поддержании веса, но доказательств этому в настоящее время нет.
Также важно понимать, что сумма

жира, окисленного во время упражнений, очень мало. Скорость окисления жира составляет в среднем 0,5 грамма в минуту при оптимальной интенсивности упражнений. Итак, чтобы окислить 1 кг жировой массы, требуется более 33 часов упражнений! Ходьба или бег с уровнем VO2max около 50-65% кажутся оптимальной интенсивностью для окисления жира.Однако продолжительность упражнений играет решающую роль, поскольку при более длительных упражнениях возрастает важность окисления жиров. Конечно, это также может увеличить ежедневный расход энергии. Если упражнения являются единственным вмешательством, основной целью обычно является увеличение расхода энергии и уменьшение жировых отложений. Однако в сочетании с диетической программой он в основном используется для противодействия снижению окисления жиров, часто наблюдаемому после потери веса (11).

Сводка

Более высокая скорость окисления жиров во время упражнений обычно свидетельствует о хорошем тренировочном статусе, тогда как низкая скорость окисления жиров может быть связана с ожирением и инсулинорезистентностью.В среднем, пик окисления жиров достигается при умеренной интенсивности 50-65%. VO2max, в зависимости от тренировочного статуса людей (2,8), увеличивается с увеличением продолжительности упражнений, но подавляется приемом углеводов. Подавляющее большинство пищевых добавок не имеют желаемого эффекта. В настоящее время единственный высокоэффективный способ увеличить окисление жиров — это упражнения, хотя до сих пор неясно, какой режим тренировок лучше всего подходит для достижения наибольших улучшений. Наконец, важно отметить, что существует очень большая индивидуальная вариация окисления жиров, которая лишь частично объясняется факторами, упомянутыми выше.Это означает, что, хотя упомянутые выше факторы могут влиять на окисление жиров, они не могут предсказать скорость окисления жиров у человека.

Список литературы

1. J Appl Physiol 60: 562-567, 1986
2. Int J Sports Med 24: 603-608, 2003
3. Int J Sports Med 26 Дополнение 1: S28-37, 2005
4. Am J Clin Nutr 87: 778-784, 2008
5. J Sports Sci 21: 1017-1024, 2003
6. J Appl Physiol 104: 1045-1055, 2008
7. Метаболизм 52: 747-752, 2003
8. J Appl Physiol 98: 160-167, 2005
9. Питание 20: 678-688, 2004
10. J Appl Physiol 56: 831-838, 1984
11. Int J Obes Relat Metab Disord 17 Suppl 3: S32-36; обсуждение С41-32, 1993

Взрыв на полную мощность сжигание жира!

В фитнес-индустрии есть две большие цели; сбросить жир и нарастить мышцы.Оба являются антагонистическими принципами, поскольку один требует избытка калорий, а другой — дефицита калорий. Шансы на то, что вы сможете выполнить и то и другое одновременно, невелики (за исключением тех, кто только начинает заниматься фитнесом, или тех, кто придерживается очень, очень продвинутых планов).

Вы всегда добьетесь наилучших результатов, если сможете приложить все свои усилия и сосредоточиться на одной единственной цели, усердно работать, а затем переключить передачи, когда будете готовы.

Тем не менее, понимание процесса липолиза, то есть того, как организм сжигает жир, поможет вам продвинуться вперед в достижении вашей цели — сжигании жира.

Липолиз можно определить как процесс расщепления хранящихся в организме триглицеридов (или триглицеридов в крови для пищи, которую мы только что съели) на два основных компонента: глицерин и жирные кислоты.

Для того, чтобы это произошло, должен присутствовать фермент, называемый чувствительной липазой (HSL), и для того, чтобы он был активным, происходит серия внутриклеточных реакций. Именно на эти внутриклеточные реакции оказывает влияние большинство добавок.

Инсулин

Еще одним ключевым элементом процесса липолиза является инсулин.Основная роль инсулина в организме — действовать анаболически, производя сложные молекулы из более простых по форме.

Однако имейте в виду, что анаболики в этой ситуации не всегда обязательно означают анаболики для наращивания мышечной массы. Хотя, безусловно, инсулин является ключевым фактором роста и развития мышечной ткани, когда инсулин присутствует в ситуации, когда потребляется больше калорий, чем необходимо в любой момент, он также будет анаболическим с точки зрения жировой ткани.

Когда это произойдет, организм начнет вырабатывать триглицериды. Когда инсулин отсутствует в организме в сочетании с гипокалорийной диетой, именно тогда эти свободные жирные кислоты высвобождаются из жировых клеток и происходит потеря жира.

Стимуляция липолиза

Наряду с ролью, которую играет инсулин, существуют и другие гормоны, которые также играют роль во время липолиза. Адреналин, норадреналин, глюкагон (который антагонистичен инсулину) и адренокортикотропный гормон — все они будут способствовать процессу липолиза.

Опять же, это еще одна область, где могут пригодиться добавки. Увеличивая концентрацию этих гормонов в организме, вы увидите большее усиление процесса липолиза, тем самым способствуя процессу похудания.

Однако учтите, что даже если эти гормоны присутствуют, у вас все равно должен быть дефицит калорий. Независимо от того, какую добавку вы принимаете, если вы потребляете в день больше калорий, чем необходимо для поддержания веса тела, организму придется что-то делать с этим избытком.

Он может формировать новую мышечную ткань (что весьма вероятно, если вы тренировались с отягощениями), но есть предел тому, сколько новых мышц можно построить в любой момент времени. После того, как он достигнет максимума в развитии мышц, начнется накопление жира.

Начало процесса сжигания жира

Итак, ваша работа по сжиганию жира может быть представлена ​​в нескольких этапах.

Во-первых, вы должны потреблять меньше калорий, чем необходимо для поддержания веса вашего тела.Независимо от типов макроэлементов, которые вы едите, и процента, который они составляют в вашем рационе, если вы едите больше, чем сжигаете, вы не потеряете жир.

Вторая часть — это контроль над инсулином, чтобы он работал на вас, а не против вас. Как ты это делаешь? — правильно рассчитав потребление углеводов.

Инсулин — это одновременно и хорошо, и плохо; это хорошо тем, что его присутствие поможет глюкозе, которую вы потребляете из углеводов, попасть в мышечные клетки, пополняя запасы гликогена в мышцах, чтобы вы могли быстрее восстанавливаться между тренировками и наращивать новую мышечную ткань.

С другой стороны, это плохо, потому что, если в остальное время он будет в высоких концентрациях, он будет способствовать увеличению жира, если предположить, что есть лишние калории.

Убедившись, что вы испытываете дефицит калорий, вы действительно опередите все в деле обеспечения того, чтобы не добавлялся дополнительный жир.

Но, кроме того, неплохо было бы попытаться сосредоточить большую часть углеводов, которые вы потребляете в своей гипокалорийной диете, примерно во время тренировки. Именно тогда ваше тело нуждается в них больше всего и сможет наиболее эффективно восполнить этот мышечный гликоген.

Поймите, что не углеводы сами по себе заставляют вас набирать жир, а постоянное потребление углеводов в течение дня при наличии избыточных калорий.

Откуда берутся стимуляторы

Наконец, нам нужно посмотреть, где стимуляторы вступают в игру и как они могут помочь вашему процессу. Как отмечалось выше, некоторые стимулирующие продукты повышают концентрацию гормонов в организме, которые запускают процесс липолиза.

Некоторые добавки, например Биотест «Hot Rox», также способствуют нормальному обмену веществ.Поскольку щитовидная железа отвечает за ваш естественный уровень метаболизма, содействие этому будет способствовать процессу похудания.

Другие добавки, например Nutrex Lipo 6, содержат синефрин, который представляет собой адренергический амин, который будет стимулировать определенные рецепторы для увеличения высвобождения адреналина и норадреналина, которые, как обсуждалось выше, вызывают процесс липолиза.

Заключение

Итак, когда дело доходит до потери жира, существует множество факторов.Это всего лишь очень краткий обзор того, что происходит, в действительности происходит гораздо более интенсивный клеточный процесс, который может быть изменен в зависимости от ряда ситуаций (какой процент жира в организме вы используете в настоящее время, какой тип тренировок вы делаете и тд).

В целом, если ваша цель — сжигание жира, вам стоит обратить внимание на добавки, которые помогут в процессе липолиза, а также обеспечат восполнение дефицита калорий. Как только они будут установлены, вы можете приступить к изучению других придирчивых факторов, которые могут иметь небольшой эффект.

Снижение веса и липолиз способствуют динамическому иммунному ответу в жировой ткани мышей

Abstract

Ожирение вызывает иммунный ответ, характеризующийся привлечением миелоидных клеток к ключевым органам обмена веществ, включая жировую ткань. Однако реакция иммунных клеток на непатологические метаболические стимулы менее изучена, а факторы, регулирующие метаболически-зависимое накопление иммунных клеток, изучены не полностью.Здесь мы охарактеризовали реакцию макрофагов жировой ткани (ATM) на потерю веса и голодание у мышей и определили роль липолиза в рекрутинге и накоплении ATM. Мы обнаружили, что иммунный ответ на потерю веса был динамичным; ограничение калорийности мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, привело к первоначальному увеличению набора ATM, тогда как содержание ATM снизилось после продолжительного периода потери веса. Пик числа АТМ совпал с пиком циркулирующих концентраций СЖК и липолиза жировой ткани, что позволяет предположить, что липолиз вызывает накопление АТМ.Действительно, голодание или фармакологически индуцированный липолиз быстро увеличивал накопление ATM, активность хемоаттрактанта жировой ткани и захват липидов ATM. И наоборот, диетические и генетические манипуляции, снижающие липолиз, уменьшали накопление АТМ. Истощение макрофагов в культурах жировой ткани увеличивает экспрессию липазы триглицеридов жиров и генов, регулируемых FFA, и увеличивает липолиз. Эти данные предполагают, что локальные липидные потоки являются центральными регуляторами рекрутирования ATM и что после рекрутирования ATMs образуют нагруженные липидами макрофаги, которые могут буферизовать локальное повышение концентрации липидов.

Введение

Ожирение активирует сложную иммунную программу, центральными особенностями которой являются дифференциация, активация и рекрутирование лимфоидных и миелоидных клеток в ключевые метаболические ткани (1–11). У млекопитающих увеличение массы жировой ткани вызывает накопление макрофагов жировой ткани (ATM), которые продуцируют провоспалительные молекулы, включая TNF-α, SAA3 и CCL2 (MCP-1) (2, 12). Банкоматы способствуют как местному, так и системному воспалению и модулируют метаболические фенотипы, включая резистентность к инсулину (13).Генетические и фармакологические манипуляции, которые уменьшают содержание АТМ или изменяют их воспалительное состояние у тучных грызунов, модулируют местное воспаление и связаны со снижением инсулинорезистентности (14). Например, дефицит или антагонизм Ccr2 снижает рекрутирование ATM и частично защищает мышей от инсулинорезистентности, вызванной ожирением (15). Сходным образом, миелоидная клеточно-специфическая делеция IKK-β, регулирующая воспалительный путь, снижает вызванное ожирением воспаление и индуцированную диетой инсулинорезистентность (6, 16).

Метаболические факторы, регулирующие иммунный ответ на ожирение и накопление макрофагов и других иммунных клеток в жировой ткани, остаются плохо изученными. У людей со стабильным весом и грызунов или тех, кто набирает вес, существует сильная положительная корреляция между размером адипоцитов и содержанием АТМ (2, 17, 18). Эта корреляция предполагает, что накопление макрофагов происходит в ответ на процесс, связанный с увеличением объема адипоцитов. Cinti и его коллеги предположили, что некротическая гибель адипоцитов, которая, по их гипотезе, вызвана гипертрофией и ускоряется ожирением, является основным стимулом, регулирующим накопление АТМ (19).Действительно, массивный апоптоз адипоцитов в трансгенной модели индуцибельной липоатрофии приводит к быстрому накоплению ATM (20) и предполагает, что гибель адипоцитов может управлять накоплением ATM. Однако недавние исследования показывают, что скорость гибели адипоцитов не увеличивается у лиц с ожирением (21). Другая убедительная гипотеза заключается в том, что гипоксия влияет на набор сотрудников банкоматов. В этой модели гипертрофия адипоцитов создает области микрогипоксии, которые активируют воспалительные программы, важные для ремоделирования сосудистой сети.Эти пути включают регулируемое JNK1 высвобождение хемокинов (22-24). Однако в недавнем исследовании экспрессия в жировой ткани Hif1a , основного фактора, опосредующего реакцию гипоксии, и Vegfa , ключевой нижестоящей мишени Hifa , отрицательно коррелировала с содержанием ATM (17).

Увеличение массы жировой ткани и объема адипоцитов имеет другие широкие метаболические последствия, включая снижение функции митохондрий, повышенный стресс ER, нарушение передачи сигналов инсулина и более высокую скорость базального липолиза (25–28).Ключ к разгадке функции ATM и их регуляции может быть получен из наблюдения, что с увеличением ожирения ATMs образуют многоядерные синцитии, содержащие большие липидные капли (19, 29), что позволяет предположить, что при ожирении ATMs фагоцитируют или поглощают избыток липидов. Тесная связь размера адипоцитов с накоплением макрофагов и захватом липидов предполагает, что избыток липидов может иметь решающее значение для накопления ATM. Поэтому мы предположили, что иммунная система и макрофаги напрямую реагируют на изменения в метаболической функции и потоках субстратов, и, в частности, что вызванное ожирением увеличение базального липолиза (в силу увеличения объема жировых клеток) (25) увеличит локальные концентрации внеклеточных липидов и приведет к возникновению АТМ. накопление.В соответствии с этой гипотезой депо висцеральной жировой ткани — по сравнению с подкожными депо брюшной полости — имеют повышенную базальную скорость липолиза и содержат больше банкоматов (18, 30, 31). Если усиленный липолиз вызывает накопление АТМ, то изменение липолиза должно изменить накопление АТМ предсказуемым образом. Общий липолиз представляет собой сумму (а) базального липолиза, который в значительной степени определяется содержанием триглицеридов в адипоцитах, и (б) липолиза по требованию, который представляет собой гормонально регулируемое высвобождение FFA в ответ на потребности в питании.Ожирение увеличивает размер адипоцитов и, следовательно, базальный липолиз. Отрицательный энергетический баланс приводит к мобилизации запасов триглицеридов жировой ткани и активирует липолиз по требованию; следовательно, у лиц с ожирением во время ранней потери веса, когда содержание триглицеридов в адипоцитах остается высоким, как базальный, так и требуемый липолиз высоки, и, если наша гипотеза верна, содержание ATM должно быть повышено.

Несмотря на то, что были проведены подробные исследования накопления макрофагов в жировой ткани во время набора веса, кинетика накопления АТМ во время похудания остается плохо определенной.Постоянное увеличение веса и массы жировой ткани приводит к пропорциональному увеличению содержания АТМ (2, 5, 18). После стойкой потери веса содержание макрофагов снижается (32). Однако наша гипотеза предсказывает, что достижение отрицательного энергетического баланса за счет увеличения липолиза потребности должно нарушить корреляцию между массой жировой ткани / объемом адипоцитов и содержанием макрофагов во время ранней потери веса, когда объем адипоцитов и базальный липолиз существенно не снижаются, но потребность в липолизе высока.

Чтобы определить, влияет ли липолиз, вызванный потерей веса, накопление АТМ в жировой ткани, мы измерили содержание АТМ у мышей с ожирением, получавших пищу с высоким содержанием жира, которым проводилось умеренное ограничение калорийности, и контролировали кинетику накопления макрофагов в течение 2-месячного периода. Мы непосредственно определили, увеличивает ли накопление АТМ липолиз жировой ткани натощак и фармакологически. Напротив, мы снизили скорость липолиза жировой ткани за счет изокалорийного замещения углеводов пищевым жиром и изучили эффекты голодания у мышей с дефицитом Atgl / Pnlap2 , чтобы оценить, снижает ли снижение липолиза накопление ATM.Мы изучили эффекты индуцирования липолиза на банкоматах in vivo и в интактной жировой ткани in vitro, чтобы определить, активирует ли липолиз сам по себе захват FFA банкоматами. Наконец, мы удалили макрофаги из жировой ткани in vitro и обнаружили, что в отсутствие ATM экспрессия липазы Atgl / Pnpla2 и липолиз в жировой ткани увеличиваются. Наши результаты подтверждают модель, в которой липолиз жировой ткани приводит к накоплению АТМ и рекрутированным макрофагам в буфер, локальное увеличение концентрации липидов за счет фагоцитоза и, возможно, за счет модуляции метаболизма адипоцитов.

Результаты

Потеря веса вызывает кратковременное скопление банкоматов.

Чтобы понять, как иммунная система — и в частности банкоматы — реагирует на потерю веса, мы охарактеризовали метаболический и воспалительный фенотипы мышей с ожирением, которые подвергались умеренному ограничению калорийности. Девятинедельных самцов мышей C57BL / 6J кормили диетой с высоким содержанием жиров (60% калорий приходилось на жир; дополнительная таблица 1; дополнительные материалы доступны в Интернете вместе с этой статьей; doi: 10.1172 / JCI42845DS1), пока они не достигнут массы тела 40 граммов. Затем эти животные были подвергнуты ограничению калорийности (они получали 70% корма ad libitum), чтобы вызвать постепенную потерю веса. Мышей умерщвляли и собирали ткани через 0, 3, 7, 14, 21, 42 и 60 дней ограничения калорийности. Группа мышей соответствующего возраста, получавших постную пищу, была изучена в качестве контроля (дополнительный рисунок 1A). В начале ограничения калорийности все мыши, получавшие диету с высоким содержанием жиров, имели одинаковый состав тела, уровень глюкозы в крови натощак и концентрации инсулина в сыворотке (дополнительная таблица 2).Мы чередовали распределение мышей по разным группам ограничения калорийности, гарантируя, что средний возраст каждой умерщвленной группы существенно не отличался (дополнительный рисунок 2A). Как и ожидалось, этот протокол умеренного ограничения калорийности вызывал постепенное снижение веса и жировой массы без значительного влияния на мышечную массу (дополнительный рисунок 1, B и C и дополнительный рисунок 2B). Общая жировая масса, измеренная с помощью ЯМР-спектроскопии, заметно снизилась к 14 дню. Мыши продолжали терять вес на протяжении всего вмешательства, и в конце ограничения калорийности они потеряли 27.9% от их исходной массы тела (40,8 ± 0,3 г против 29,4 ± 3,8 г; P <0,001). Все жировые отложения уменьшались в массе с одинаковой скоростью (дополнительный рисунок 1D), и уменьшение жировой массы было связано с уменьшением размера адипоцитов, а не с уменьшением количества адипоцитов (дополнительный рисунок 1, C – F). Уменьшение размера адипоцитов, как и ожидалось, сопровождалось снижением экспрессии гена лептина и концентрации лептина в сыворотке (дополнительные рисунки 3, A и B).

Во время набора веса и в поперечных исследованиях людей со стабильным весом наблюдается положительная, почти линейная зависимость между ожирением и маркерами местного и системного воспаления (13).После потери веса примерно на 17% у пациентов через 3 месяца после бариатрической операции содержание АТМ и воспаление жировой ткани уменьшаются, а чувствительность к инсулину улучшается (32, 33). Однако исследований связи между ожирением и показателями воспаления во время динамической потери веса было немного. Недавнее исследование Лангина и его коллег предполагает, что во время ранней потери веса у людей экспрессия воспалительных генов не снижается (34).

Чтобы обеспечить большее временное разрешение взаимосвязи между ожирением и метаболическими и воспалительными фенотипами во время похудания, мы измерили уровень глюкозы в крови натощак, сывороточный инсулин и экспрессию воспалительных генов в жировой ткани в нашей когорте мышей в течение 2 месяцев непрерывной потери веса.Концентрации глюкозы в крови натощак и сывороточного инсулина оставались повышенными в течение первой недели потери веса, но после этого значительно снизились, одновременно со снижением процента жира в организме (дополнительный рисунок 4). Напротив, снижение экспрессии воспалительных генов в перигонадной жировой ткани не было равномерным, и несколько классов генов были идентифицированы на основе их характера экспрессии во время потери веса. Экспрессия некоторых воспалительных генов, таких как Saa3 , снизилась на ранних этапах потери веса, что предшествовало улучшению гомеостаза глюкозы, тогда как экспрессия других прототипных воспалительных генов M1, включая Tnf ( Tnfa ), оставалась повышенной в течение всего периода. когда животные находились в отрицательном энергетическом балансе (дополнительный рисунок 5).Циркулирующие воспалительные белки также подразделяются на несколько классов в ответ на отрицательный энергетический баланс, при этом концентрации некоторых воспалительных молекул, например резистина, рано падают во время потери веса и до улучшения метаболизма, в то время как концентрации других, например, PAI-1 оставался неизменным во время ограничения калорийности и потери веса (дополнительный рисунок 3, C и D).

В отличие от других классов генов, экспрессия в жировой ткани специфичных для макрофагов / миелоидных клеток генов Emr1 (F4 / 80), Cd68 и Csf1r увеличивалась после 3 дней ограничения калорийности (Рисунок A ).Однако к 60 дням потери веса экспрессия Emr1 и Cd68 снижалась до уровней ниже тех, которые присутствовали до начала потери веса. Позднее снижение экспрессии генов, специфичных для макрофагов, согласуется с предыдущими исследованиями, в которых изучались эффекты долгосрочной потери веса. Чтобы определить, было ли начальное увеличение и окончательное снижение экспрессии генов, специфичных для макрофагов / миелоидов, связано с изменениями экспрессии генов или с изменением количества макрофагов, мы провели иммуногистохимию с использованием антитела, которое распознает антиген макрофагов F4 / 80 (EMR1).В соответствии с исследованиями экспрессии генов, количество макрофагов в перигонадной жировой ткани увеличивалось в течение первой недели потери веса. Через три дня после начала ограничения калорийности в перигонадальной жировой ткани было на 47% больше макрофагов, чем в жировой ткани контрольных мышей, получавших ad libitum (процент макрофагов на общее количество клеток: 38,6% ± 4,1% против 26,3% ± 7,4%; P <0,01; Рисунок, B и C). Мы и другие ранее показали, что существует сильная положительная корреляция между ожирением и содержанием банкоматов (2, 18).Однако при похудании эта связь теряется. Вместо этого во время начального периода потери веса (дни 0–7 в нашем исследовании) у более стройных мышей обнаруживается больше банкоматов (рисунок D), тогда как позже, во время потери веса, обнаруживается более типичная положительная корреляция (рисунок D). Идентичные отношения были обнаружены при построении графика зависимости содержания АТМ от размера адипоцитов (данные не показаны). Банкоматы, в частности банкоматы CD11c ⁺ и короноподобные структуры (CLS) CD11c ⁺ , наиболее тесно связаны с воспалением жировой ткани и системной инсулинорезистентностью.Почти все клетки CD11c ⁺ в перигонадальной жировой ткани мышей во время ранней потери веса также были F4 / 80 ⁺ (CD11c ⁺ ATM) (дополнительная фигура 6). Хотя общее количество банкоматов увеличивалось во время ранней потери веса, количество банкоматов CD11c ⁺ и CLS не увеличивалось (дополнительный рисунок 7), что соответствует накоплению популяции банкоматов CD11c ^— во время ранней потери веса и отсутствию увеличения маркеров воспаления или нарушения инсулинорезистентности в этот же период (дополнительные рисунки 4 и 5).

При похудании содержимое банкомата увеличивается, затем уменьшается.

( A ) Экспрессия генов, кодирующих миелоидно-макрофагальные белки в перигонадальной жировой ткани. Черные столбцы представляют мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые подвергались ограничению калорийности в течение различных интервалов времени. Белые столбики представляют контрольных худых мышей, которых кормили пищевой диетой (CD) и которые не подвергались ограничению калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в перигонадальных срезах жировой ткани мышей во время потери веса после указанного количества дней ограничения калорийности.Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( C ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадальной жировой ткани. n = 5–6 мышей / группа. ( D ) Взаимосвязь между содержанием макрофагов и массой тела у мышей в течение первых 7 дней потери веса (левая панель) и в течение 14-60 дней потери веса (правая панель). Показаны квадратные значения коэффициентов корреляции Пирсона. Каждая точка данных представляет собой% макрофагов в перигонадальной жировой ткани мышей при разном весе тела во время ограничения калорийности.( E ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в срезах подкожной жировой ткани. Масштабные линейки: 50 мкм. ( F ) Макрофаги в процентах от всех клеток подкожной жировой ткани мышей во время потери веса. n = 5–6 мышей / группа. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 по сравнению с днем ​​0.

Раннее первоначальное увеличение содержания АТМ не было уникальным для перигонадальной жировой ткани.В соответствии с предыдущими данными у мышей с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров, в подкожной жировой ткани содержание ATM было ниже, чем в перигонадной жировой ткани (2, 32). Однако после 3 дней ограничения калорий содержание АТМ удвоилось в подкожных депо (макрофаги в процентах от всех клеток: 10,0 ± 3,1% против 20,2 ± 7,4%; P <0,05; Рисунок, E и F) . Как в перигонадных, так и в подкожных депо количество АТМ постепенно уменьшалось после 3 дней отрицательного энергетического баланса, так что после 42 дней ограничения калорий содержание АТМ было значительно ниже, чем в жировой ткани мышей с высоким содержанием жира, которые никогда не ограничивались калорийностью ( Рисунок, B, C, E и F).

Было высказано предположение, что во время набора веса накопление АТМ вызвано некрозом адипоцитов, ремоделированием ткани или микрогипоксией. Первоначальное увеличение ATM в ответ на потерю веса не было связано со снижением количества адипоцитов, как можно было бы ожидать, если некроз адипоцитов приводил к накоплению ATM (дополнительный рисунок 1F). Также пик в ATM не совпал с активацией транскрипционной программы ремоделирования жировой ткани (дополнительный рисунок 8).

Показатели липолиза коррелируют с содержанием АТМ.

Первоначальное увеличение количества банкоматов было связано с изменениями в концентрации циркулирующих FFA и показателями липолиза. Базальный липолиз в жировой ткани — это высвобождение FFA из адипоцитов, которое происходит при отсутствии отрицательного энергетического баланса. Базальный липолиз увеличивается в жировой ткани у лиц с ожирением и положительно коррелирует с размером адипоцитов (25). Липолиз по требованию — это гормонально и автономно управляемое высвобождение FFA из триглицеридов адипоцитов, которое активируется отрицательным энергетическим балансом, когда FFA мобилизуются из жировой ткани для системного использования в качестве субстратов (25).Модель, в которой липолиз регулирует накопление АТМ, согласуется с предыдущими наблюдениями за людьми со стабильным весом или набором веса: у тучных мышей с большими адипоцитами наблюдается более высокий базальный липолиз жировой ткани и большее содержание АТМ, чем у тощих животных. Во время ранней потери веса, когда размер адипоцитов существенно не изменился, базальный липолиз остается высоким, а потребность в липолизе увеличивается, и, таким образом, мы прогнозируем чистое увеличение общего липолиза. Но по мере уменьшения массы жировой ткани и размера адипоцитов базальный липолиз также уменьшается, и чистый отток липидов из жировой ткани уменьшается.Концентрации FFA в сыворотке коррелируют с общей скоростью липолиза и потоками жирных кислот в жировой ткани (25, 35). Следовательно, если липолиз действительно играет роль в накоплении ATM, мы предсказали, что FFA в сыворотке будет коррелировать с содержанием ATM у наших мышей с ограничением калорийности. Действительно, сывороточные концентрации FFA были выше на 3-й день ограничения калорий, до значительной потери веса, и совпадали с пиком содержания макрофагов (Рисунок A). В соответствии с нашей гипотезой существовала положительная корреляция между концентрацией FFA в сыворотке и процентом ATM в перигонадной жировой ткани на протяжении всего периода ограничения калорийности (Рисунок B).

Показатели липолиза коррелируют с содержанием АТМ.

( A ) Концентрации FFA в сыворотке во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. Черные столбцы представляют мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые подвергались ограничению калорийности в течение различных интервалов времени. Белая полоса представляет контрольных худых мышей, которых кормили кормовой диетой и которые не подвергались ограничению калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Корреляция содержания макрофагов (% макрофагов) и концентрации FFA в сыворотке у мышей во время потери веса; показано квадратное значение коэффициента корреляции Пирсона. n = 5–6 мышей / группа. Каждая точка данных представляет собой% макрофагов в перигонадальной жировой ткани мыши при различных концентрациях FFA в сыворотке. ( C ) Экспрессия в перигонадной жировой ткани гена, кодирующего липазу ATGL, у мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( D ) Высвобождение FFA из эксплантатов перигонадальной жировой ткани, инкубированных в базовых условиях. Эксплантаты были изолированы от мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или которые подвергались ограничению калорийности в течение 3 или 42 дней.( E ) Высвобождение глицерина из эксплантатов перигонадной жировой ткани, инкубированных в базовых условиях. Эксплантаты были изолированы от мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или которые подвергались ограничению калорийности в течение 3 или 42 дней. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05 по сравнению с днем ​​0.

В жировой ткани стадия ограничения скорости как базального липолиза, так и липолиза по потребности регулируется ферментом, кодируемым Atgl / Pnpla2 . Экспрессия Atgl / Pnpla2 регулируется нутритивным статусом и тесно коррелирует со скоростью липолиза жировой ткани (36).В соответствии с пиком липолиза жировой ткани на 3-й день ограничения калорийности экспрессия в жировой ткани Atgl / Pnpla2 увеличивалась на 3-й день ограничения калорийности и возвращалась к исходному уровню на 42-й день (Рисунок C). Напротив, экспрессия гормоночувствительной липазы, кодируемой Hsl / Lipe , не коррелирует со статусом питания. Hsl / Lipe уровни мРНК подавляются во время острого голодания и повышаются только после длительного голодания (36).В соответствии с этими данными, мы не наблюдали никаких изменений в уровнях Hsl / Lipe во время ограничения калорийности (дополнительный рисунок 9A).

Циркулирующие концентрации FFA и экспрессия Atgl / Pnpla2 обеспечивали косвенные измерения липолиза жировой ткани. Для прямого измерения липолиза в жировой ткани во время ограничения калорийности скорости высвобождения неэтерифицированных FFA и глицерина измеряли в перигонадальной жировой ткани мышей во время ограничения калорийности.В соответствии с нашими косвенными измерениями, липолиз увеличивался в жировой ткани мышей после 3 дней ограничения калорий по сравнению с жировой тканью мышей, получавших ad libitum (рисунок, D и E). Высвобождение FFA и глицерина снизилось через 42 дня. Эти данные демонстрируют положительную корреляцию между липолизом жировой ткани и содержанием АТМ. Чтобы напрямую определить, влияет ли увеличение или уменьшение липолиза на накопление АТМ, мы провели ряд диетических, фармакологических и генетических манипуляций.

Липолиз вызывает накопление АТМ.

Если липолиз вызывает накопление ATM в жировой ткани, то голодание, которое быстро увеличивает гидролиз триглицеридов жировой тканью, также должно увеличивать содержание ATM. Перигонадную жировую ткань собирали у мышей C57BL / 6J с ожирением, получавших пищу с высоким содержанием жира, которые либо голодали в течение 24 часов, либо кормились ad libitum. Голодание вызывало увеличение концентрации FFA в сыворотке (рис. A) и приводило к быстрому накоплению ATM. По сравнению с жировой тканью мышей, получавших ad libitum, жировая ткань голодных мышей содержала на 65% больше ATM (процент макрофагов на общее количество клеток: 22.9% ± 6% против 37,9% ± 3,5%; P <0,01; Рисунок, Б – Г). Накопление АТМ, вызванное голоданием, не ограничивалось тучными мышами. У худых мышей экспрессия генов, специфичных для макрофагов, Emr1 и Csf1r , увеличивалась в 3 и 4 раза соответственно после 24-часового голодания (Рисунок E). В соответствии с нашими наблюдениями, что ограничение калорийности не вызывает накопление CD11c ⁺ ATM, экспрессия Itgax ( Cd11c ) не изменяется при голодании (Рисунок E).

Индукция липолиза увеличивает содержание макрофагов в жировой ткани.

( A ) Концентрации FFA в сыворотке у мышей с ожирением ad libitum, получавших пищу ad libitum и голодавших 24 часа в сутки, вызванных диетой с высоким содержанием жиров. n = 5–6 мышей / группа. ** P <0,01 по сравнению с кормлением ad libitum (кормление Ad lib). ( B и C ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в перигонадальных срезах жировой ткани из индуцированного диетой с высоким содержанием жиров ожирения ad libitum ( B ) и мышей, голодавших 24 часа (). С ).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( D ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадной жировой ткани от мышей с ожирением ad libitum, получавших пищу ad libitum и голодавших 24 часа натощак, вызванного диетой с высоким содержанием жиров. n = 5–6 мышей / группа. ** P <0,01 по сравнению с кормлением ad libitum. ( E ) Экспрессия генов, кодирующих белки, специфичные для миелоидных макрофагов, у мышей, получавших постное питание ad libitum и голодавших 24 часа в сутки. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05 по сравнению с кормлением ad libitum.( F ) Протокол фармакологически индуцированного липолиза адипоцитов с помощью β3-адренергического агониста (CL316,243) у худых мышей. ( G — I ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1) в перигонадальных срезах жировой ткани от тощих мышей, получавших носитель ( G ) или CL316 243 ( H и I ) ). Многоядерные гигантские клетки, содержащие липидные капли, видны на некоторых участках ( I ). Стрелки указывают банкоматы.Масштабные линейки: 50 мкм. ( J ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадальной жировой ткани от мышей, обработанных носителем и CL316,243. n = 5 мышей / группа. *** P <0,001 по сравнению с носителем. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Активация β3-адренергического рецептора ( Adrb3 ), который у мышей почти исключительно экспрессируется адипоцитами, увеличивает липолиз адипоцитов. Граннеман и его коллеги ранее отмечали, что β3-адренергическая стимуляция приводит к накоплению миелоидных клеток в жировой ткани (37).Чтобы определить, будет ли фармакологическая активация липолиза увеличивать накопление ATM, мы дважды вводили мышам C57BL / 6J (масса тела = 24,5 ± 0,8 г) β3-адренергический агонист CL316,243 с интервалом в 4 часа. Депо жировой ткани собирали через 14 часов после последней инъекции (Рисунок F). По сравнению с контрольными мышами, фармакологическая индукция липолиза быстро увеличивала содержание ATM в перигонадальной жировой ткани более чем в 5 раз, до уровней, типичных для мышей с ожирением (рисунок, G – J).Макрофаги были видны как по отдельности, так и в скоплениях (Рисунок, G – I). Таким образом, среди гормональных сигналов, активируемых голоданием, β3-адренергическая индукция липолиза адипоцитов достаточна для индукции быстрого рекрутирования макрофагов. Подобно нашим наблюдениям при ранней потере веса и голодании, рекрутированные β3-адренергическими агентами макрофаги не увеличивают воспалительный фенотип жировой ткани (дополнительный рисунок 9E).

Уменьшение липолиза во время похудания или голодания снижает накопление АТМ.

Если наша гипотеза верна, то манипуляции, ингибирующие липолиз во время раннего похудания или голодания, должны уменьшить или предотвратить накопление АТМ. Хотя диета с высоким содержанием жиров увеличивает количество пищевых липидов, они также являются кетогенными при отрицательном энергетическом балансе. По сравнению с диетами с высоким содержанием жиров при отрицательном энергетическом балансе, диеты с высоким содержанием углеводов увеличивают соотношение циркулирующего инсулина / глюкагона и снижают мобилизацию липидов и скорость липолиза в жировой ткани (38). Поэтому мы повторили интервенцию по ограничению калорийности, добавив группу мышей соответствующего веса, которые были ограничены в калориях на изокалорийной высокоуглеводной диете (дополнительная таблица 1).Мышей поддерживали ограничение калорийности в течение 3 дней, и мышей в обеих группах в равной степени ограничивали (на 30% меньше калорий, чем их потребление ad libitum). В конце ограничения калорийности не было никакой разницы в весе между группами с ограничением калорийности диеты с высоким содержанием углеводов и с высоким содержанием жиров. Однако, как и ожидалось, концентрация FFA в сыворотке мышей с ограничением калорийности рациона с высоким содержанием углеводов была на 36% ниже, чем у мышей с ограничением калорийности рациона с высоким содержанием жиров (0,38 ± 0,11 против 0.59 ± 0,07 ммоль / л; P <0,05) (Рисунок A). В соответствии с нашей гипотезой, во время потери веса содержание АТМ было на 35% ниже (31,1% ± 4,1% против 20,1% ± 5,2%; P <0,05) в перигонадальной жировой ткани у мышей, получавших высокоуглеводную диету, по сравнению с таковыми. питались диетой с высоким содержанием жиров (Рисунок, B и C).

Ингибирование липолиза посредством диетических манипуляций ограничивает накопление АТМ во время ранней потери веса.

Протокол ограничения калорийности использовался для индукции потери веса с более низкой скоростью липолиза по сравнению с ограничением калорийности мышей на диете с высоким содержанием жиров.Мышей с ожирением, вызванным высокожировой диетой, кормили 70% калорий ad libitum в течение 3 дней в виде диеты с высоким содержанием углеводов или жиров. ( A ) Сыворотка FFA у мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности диеты с высоким содержанием жиров или углеводов. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Срезы перигонадной жировой ткани мышей во время потери веса, вызванной диетой с высоким содержанием жиров (левая панель) или высоким содержанием углеводов (правая панель).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( C ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадной жировой ткани мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности диеты с высоким содержанием жиров или углеводов. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05, по сравнению с ограничением калорий на HFD. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Жировая триглицерид липаза (также известная как деснутрин или протеин 2, содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы) ( Atgl / Pnpla2 ) регулирует как базальный, так и необходимый липолиз в жировой ткани.Животные с дефицитом ATGL / PNPLA2 серьезно нарушены в их способности мобилизовать FFA, имеют очень низкий базальный липолиз и неспособны повышать потребность в липолизе в ответ на голодание, несмотря на сохранность гормонального и вегетативного ответа на голодание (36). Чтобы предоставить генетические доказательства того, что липолиз является критическим детерминантом содержания ATM, мы изучили эффекты голодания на мышах Atgl / Pnpla2 ^{— / —} . В соответствии с нашей гипотезой, мы обнаружили, что в неограниченном количестве — мышей Atgl / Pnpla2 ^{— / —} имели менее 3% банкоматов и что после голодания не было увеличения количества банкоматов (рисунок, A и B). или экспрессия генов, специфичных для макрофагов (рис. C).Эти данные свидетельствуют о том, что липаза ATGL / PNPLA2 необходима для рекрутирования и накопления ATM в жировой ткани.

Дефицит ATGL / PNPLA2 ограничивает накопление в банкоматах во время голодания.

( A ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1) в перигонадальных срезах жировой ткани из Atgl ^{+ / +} (верхняя панель) и Atgl ^{— / —} (нижняя панель) мышей, которых кормили ad libitum (слева) или голодали (справа).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 100 мкм. ( B ) Макрофаги в процентах от всех клеток у мышей Atgl ^{+ / +} , получавших постное питание ad libitum, и мышей Atgl ^{— / —} , получавших голодание. n = 4–5 мышей / группа. *** P <0,001 по сравнению с кормлением ad libitum. ( C ) Экспрессия генов, специфичных для макрофагов, в перигонадальной жировой ткани мышей Atgl ^{— / —} , получавших без ограничений и голодавших без пищи. n = 4–5 мышей / группа. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Липолиз жировой ткани вызывает миграцию макрофагов.

Скорость митоза в жировой ткани голодных мышей была очень низкой (<2%) и не отличалась от скорости митоза в жировой ткани у мышей, получавших ad libitum (дополнительные рисунки 9, B и C), что позволяет предположить, что липолиз -зависимое увеличение ATM было не из-за пролиферации, а следствием рекрутирования миелоидных клеток. Чтобы определить, увеличивает ли липолиз высвобождение хемоаттрактантов жировой ткани для макрофагов, мы выполнили анализ миграции с эксплантатами жировой ткани от голодных и получающих неограниченное питание мышей.Эксплантаты перигонадальной жировой ткани собирали у тощих мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали в базовых условиях или с добавлением изопротеренола для индукции липолиза. Как и ожидалось, по сравнению с жировой тканью, выделенной от мышей, получавших ad libitum, жировая ткань от голодных мышей или жировая ткань, обработанная изопротеренолом, увеличивала липолиз, о чем свидетельствует увеличение высвобождения FFA (Рисунок A). При таком увеличении липолиза пропорционально увеличивалась хемотаксическая активность жировой ткани по отношению к макрофагам, происходящим из костного мозга (BMDM).Это увеличение активности хемоаттрактанта жировой ткани было сопоставимо с таковым, индуцированным MCP-1 / CCL2 (Рисунок B). Мы также обнаружили, что в отличие от голодных мышей дикого типа, голодные CCR2-дефицитные мыши не увеличивали экспрессию генов, специфичных для макрофагов (дополнительная фигура 9D). Однако не наблюдалось увеличения экспрессии в жировой ткани известных лигандов CCR2 во время голодания (данные не показаны). Эти данные согласуются с набором банкоматов во время быстрого многоступенчатого процесса, в котором накопление предшественников ATM в кровотоке зависит от CCR2, но для перехода в депо жира действительно требуется CCR2 или его лиганд.

Липолиз вызывает миграцию макрофагов.

Эксплантаты перигонадальной жировой ткани выделяли от тощих мышей, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от голодных животных инкубировали в базовых условиях, тогда как эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) или без нее. ( A ) Концентрацию FFA измеряли в среде, кондиционированной эксплантатом. ( B ) Хемотаксическую активность контрольной среды, среды с добавлением MCP-1 / CCL2 (50 нг / мл) и среды, кондиционированной эксплантатом, измеряли с использованием стандартного анализа миграции для BMDM.Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 4, 5–8 повторностей на образец. * P <0,05; ** P <0,01.

Снижение веса и липолиз активируют программу поглощения липидов банкоматами.

Основная функция макрофагов — фагоцитоз тканеспецифических продуктов таким образом, чтобы поддерживать гомеостаз ткани. Например, в кости, остеокласте (многоядерный макрофаг кости) резорбция матрикса необходима для поддержания здоровья кости (39).По аналогии, накопление ATM в периоды повышенного липолиза может способствовать поглощению или фагоцитозу избыточных местных липидов и участвовать в обмене липидов в жировой ткани. Действительно, отличительной особенностью АТМ при ожирении является накопление внутриклеточных липидов (19, 29). В жировой ткани людей с ожирением есть банкоматы с множеством липидных капель и другие, которые образуют многоядерные гигантские клетки, содержащие большие одноглазные капли. В соответствии с основной функцией АТМ, заключающейся в поглощении липидов в периоды повышенного высвобождения FFA из адипоцитов, экспрессия в жировой ткани 2 рецепторов транспорта липидов макрофагов, Cd36 и Msr1 , увеличивается в начальный период веса. потеря (рисунок А).К 42 дню ограничения калорийности, когда липолиз жировой ткани снижается, экспрессия этих 2 генов возвращается к уровням, наблюдаемым у мышей, никогда не снижавших вес. Чтобы определить, действительно ли липолиз вызывает накопление липидов в банкоматах, мы исследовали содержание липидных капель в макрофагсодержащих стромальных сосудистых клетках (SVC) после 24-часового голодания. Пост резко индуцировал образование липидных капель в ATM и увеличивал количество липидсодержащих пузырьков на 39% в ATM, выделенных натощак, по сравнению с ATM от тучных мышей C57BL / 6J, получавших ad libitum (17.3 ± 3 против 24,1 ± 4,7 липидных везикул на клетку; P <0,001; Рисунок, Б и В). Голодание также увеличивало экспрессию генов, участвующих в захвате, хранении липидов ( Adfp , aP2 , Cd36 ) и экспорте ( Abca1 и ApoE ) в стромальной сосудистой фракции жировой ткани (Рисунок D). .

Пост резко вызывает образование липидных капель в банкоматах.

( A ) Экспрессия в жировой ткани генов, продукты которых, CD36 (Cd36) и рецептор поглотителя A (Msr1), участвуют в захвате липидов макрофагами, измеряли в перигонадной жировой ткани во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05; *** P <0,001, по сравнению с днем ​​0. ( B ) Стромальные сосудистые клетки (SVC), выделенные из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum (левая панель) или голодали. в течение 24 часов (правая панель) окрашивали на нейтральный липид масляным красным О. Масштабные полосы: 50 мкм. ( C ) Количество липидных капель в макрофагах из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. n = 5 мышей / группа. *** P <0,001. ( D ) Экспрессия генов (в стромальной сосудистой фракции), кодирующих белки, участвующие в захвате, утилизации и экспорте липидов. n = 5 мышей / группа. * P <0,05. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Чтобы более точно определить, поглощают ли АТМ липиды в ответ на липолиз как таковой, мы создали систему in vitro для оценки эффектов стимулированного адренергическим действием липолиза адипоцитов на функцию АТМ.Мы совместно культивировали SVC, которые включают макрофаги с жировой тканью от тощих мышей C57BL / 6J в присутствии адренергического стимула (изопротеренол). В отсутствие жировой ткани лечение изопротеренолом не влияло на экспрессию гена SVC или накопление липидов (фигура, A и C, и дополнительная фигура 10A). Однако в присутствии жировой ткани изопротеренол индуцировал экспрессию гена Adfp , который кодирует белок липидных капель, покрывающий липидные капли в банкоматах (19).Кроме того, экспрессия Cd36 была увеличена ( P = 0,09) (Рисунок A). Не было активации программы дифференцировки адипоцитов, то есть не было увеличения экспрессии адипонектина или лептина и снижения экспрессии Pparg (дополнительная фигура 10B). Кроме того, совместное культивирование с жировой тканью и, в большей степени, с добавлением стимуляции изопротеренолом, индуцировало экспрессию гена Ccr2 во фракции SVC, потенциально отражая активацию программы хемотаксических макрофагов (Рисунок B).Гистологически индукция липолиза привела к накоплению липидов в SVC (Рисунок, C и D) и увеличила появление многоядерных нагруженных липидами макрофагов, которые обычно наблюдаются в жировой ткани у людей с ожирением (Рисунок E).

Индукция липолиза жировой ткани активирует захват липидов банкоматами.

( A ) SVC, выделенные из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным высоким содержанием жиров, культивировали либо отдельно, либо с кусочками перигонадальной жировой ткани (полученными от тощих животных) с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) или без нее для индукции липолиза. во фракции жировой ткани.Измеряли экспрессию генов Adfp и Cd36 в SVC. n = 5 мышей / группа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( B ) Экспрессию хемокинового рецептора Ccr2 измеряли в SVC, обработанных, как описано в A . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 5 мышей / группа. ( C ) SVC, обработанные изопротеренолом, культивированным отдельно (левая панель) или с жировой тканью (правая панель), окрашивали на нейтральный липид масляным красным О. Липидсодержащие клетки отмечены стрелками.Масштабные линейки: 50 мкм. ( D ) Процент липидсодержащих клеток среди SVC, обработанных, как описано в A . n = 5 мышей / группа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; ^† P = 0,09. ( E ) Присутствие насыщенных липидами многоядерных гигантских клеток среди SVC, сокультивированных с жировой тканью в присутствии изопротеренола. Масштабная линейка: 15 мкм.

Истощение макрофагов увеличивает липолиз жировой ткани.

Привлечение ATM и поглощение липидов во время периодов липолиза привело нас к гипотезе о том, что ATM играют роль в регулировании локальных концентраций FFA. Чтобы определить, влияют ли ATM на липолиз или высвобождение липидов, мы удалили ATM из жировой ткани, которая содержала высокую концентрацию макрофагов. Эксплантаты эпидидимальной жировой ткани собирали у мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые голодали в течение 24 часов. Эксплантаты обрабатывали инкапсулированным в липосомы клодронатом для истощения ATM, а контрольные эксплантаты от тех же животных обрабатывали инкапсулированным в липосомы PBS.Клодронат представляет собой бифосфонат, который вызывает апоптоз макрофагов при фагоцитозе в липосомах. Как и ожидалось, обработка клодронатом снижала примерно на 80% содержание макрофагов, что измерялось по экспрессии маркера макрофагов Emr1 и экспрессируемого макрофагами рецептора скавенджера Msr1 . Истощение макрофагов увеличивает экспрессию липазы Atgl / Pnpla2 в 2,5 раза и увеличивает экспрессию регулируемых жирными кислотами генов Fabp4 / aP2 , Acadl и Dgat1 .Индукция липазы и генов, необходимых для метаболизма жирных кислот, предполагает, что истощение макрофагов увеличивает липолиз и субстраты FFA. Действительно, по сравнению с обработанными контрольными эксплантами жировой ткани, истощенные макрофагами эксплантаты имели на 27% более высокую скорость липолиза, измеренную по высвобождению глицерина. Чтобы оценить, может ли истощение макрофагов иметь аналогичный эффект на метаболизм FFA in vivo, мы внутрибрюшинно инъецировали худым мышам C57BL / 6J клодронат, инкапсулированный в липосомы, чтобы истощить ATM из депо внутрибрюшной жировой ткани, а затем голодали их в течение 24 часов.Обработка клодронатом по сравнению с контрольной обработкой (инкапсулированный в липосомы PBS) снижала экспрессию генов, специфичных для макрофагов, более чем на 90% (дополнительная фигура 10C). Интраабдоминальное истощение АТМ увеличивало сыворотку натощак (FFA) на 69% по сравнению с контрольными мышами, которым инъецировали липосомы (Рисунок C). Эти данные предоставляют предварительные доказательства того, что функция макрофагов частично ослабляет вызванное липолизом высвобождение FFA.

Эксплантаты жировой ткани были выделены у мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые голодали в течение 24 часов.

Впоследствии эксплантаты обрабатывали либо инкапсулированным в липосомы клодронатом, либо инкапсулированным в липосомы PBS. Эксплантаты от одних и тех же мышей обрабатывали в обоих экспериментальных условиях. ( A ) Экспрессия генов, специфичных для макрофагов, и генов, участвующих в метаболизме липидов в эксплантах. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 4 мыши / группа. ( B ) Высвобождение глицерина из эксплантатов перигонадальной жировой ткани, обработанных либо инкапсулированным в липосомы клодронатом, либо инкапсулированным в липосомы PBS.Клодронат, инкапсулированный в липосомы, вводили внутрибрюшинно худым мышам C57BL / 6J. Мышей не кормили в течение 24 часов, начиная с 3 дня после инъекции, и истощение макрофагов в перигонадной жировой ткани было подтверждено в конце периода голодания (день 4). Инкапсулированный в липосомы PBS также вводили в качестве контроля. ( C ) Концентрация FFA в сыворотке у мышей, получавших клодронат или PBS, после 24-часового голодания. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 8 мышей / группа. * P <0.05; ** P <0,01 по сравнению с обработкой PBS.

Обсуждение

Ожирение порождает сложный иммунный ответ, характерным признаком которого является накопление макрофагов в жировой ткани. Факторы, которые регулируют накопление ATM, четко не определены, и действительно, эффекты других метаболических нарушений на накопление и функцию ATM в значительной степени не исследованы. В других условиях рекрутирование предшественников миелоидных макрофагов происходит в ответ на нарушение функции ткани, обычно в ответ на повреждение или чужеродный патоген, но также в ответ на нарушения липидных потоков (40).Например, в стенке артерии локальный избыток холестерина и липопротеинов через двухэтапный процесс рекрутирования и захвата липидов приводит к накоплению нагруженных липидами макрофагов (пенистых клеток) (41). Заполненные липидами макрофаги также являются характерной находкой в ​​жировой ткани людей с ожирением (19, 29). Поэтому мы предположили, что повышенный поток липидов может также регулировать накопление ATM в депо жировой ткани. Здесь мы показали, что накопление макрофагов в жировой ткани является острой реакцией на потерю веса и регулируется липолизом жировой ткани.Эти наблюдения согласуются с предыдущими исследованиями липолиза при ожирении. Общий базальный липолиз хронически повышен в жировой ткани у людей с ожирением по сравнению с жировой тканью у худых людей (25) и в интраабдоминальном по сравнению с подкожной жировой тканью (30, 31). Именно в этих условиях и в депо, в которых липолиз выше, содержание АТМ также повышается (2, 5, 18, 33).

Роль банкоматов в развитии воспаления жировой ткани, вызванного ожирением, и связанных с ним патологических последствий, включая инсулинорезистентность, интенсивно изучается.Наши данные о том, что ATM быстро увеличивают захват липидов в ответ на липолиз адипоцитов, предполагают, что ATM могут выполнять адаптивную функцию, по крайней мере, в течение коротких периодов времени, поглощая избыток FFA (рисунок). Подобный процесс лежит в основе развития атером, когда повышенные концентрации холестерина в стенках сосудов приводят к привлечению предшественников макрофагов в субэндотелиальные пространства. Эффективный захват и клиренс липидов из сосудистой сети является адаптивным, пока макрофагальный клиренс холестерина не нарушен.Однако при развитии атером накопление холестерина опережает способность макрофагов очищать липиды; макрофаги поглощают холестерин, но не мигрируют из своего анатомического положения. Таким образом, нагруженные холестерином макрофаги со временем образуют пенистые клетки, которые остаются в стенке сосуда и становятся центральным патогенным компонентом атеросклеротических поражений (41). Во время похудания как повышение липолиза, так и увеличение АТМ являются временными. Это говорит о том, что ATM поглощают излишки липидов и выводятся из тканей.Однако при ожирении хроническое повышение липолиза и местных концентраций FFA обеспечивает постоянный сигнал для накопления макрофагов. Со временем фенотип АТМ при ожирении, в отличие от того, что наблюдается при потере веса, изменяется так, что популяция CD11c ⁺ , которая описывается как более воспалительная, преобладает и приводит к нарушению местного метаболизма.

Роль АТМ в перемещении липидов во время похудания и голодания.

Активация липолиза во время ранней потери веса и голодания увеличивает локальное высвобождение FFA (а также глицерина и других побочных продуктов липолиза), вызывая рекрутмент ATM.Однажды задействованные, ATMs фагоцитируют избыток липидов и потенциально секретируют антилиполитические факторы, которые вместе снижают локальные концентрации FFA.

Чтобы понять функции банкоматов, было предпринято множество попыток описать производство воспалительных молекул в банкоматах. Однако, как «профессиональные» фагоциты, макрофаги также эффективны в поглощении замечательного набора молекул, от небольших липидов и колоний патогенов до умирающих и мертвых клеток (42). Присутствие липидных капель внутри банкоматов, в том числе крупных однокамерных капель в многоядерных гигантских клетках, позволило некоторым предположить, что ATM в первую очередь функционируют для фагоцитоза некротических адипоцитов (19).Быстрое появление липидных капель в банкоматах во время голодания, даже у худых животных, предполагает, что привлечение макрофагов к жировой ткани, по крайней мере, во время отрицательного энергетического баланса, является частью скоординированного ответа, который может снизить локальные внеклеточные концентрации FFA.

Было обнаружено, что

FFA и другие липиды регулируют состояние активации и иммунную функцию миелоидных клеток и макрофагов. В качестве внеклеточных сигналов жирные кислоты, особенно насыщенные жирные кислоты, активируют классические воспалительные реакции в макрофагах и других иммунных клетках посредством задействования рецепторов распознавания образов, включая TLR (43–45).Наши результаты показывают, что липолиз и повышенные концентрации FFA могут также регулировать накопление макрофагов и делать это без активации провоспалительного или M1-поляризованного состояния. Увеличение количества макрофагов более чем на 40% во время начальной фазы потери веса происходит без увеличения экспрессии воспалительных генов или концентрации циркулирующих адипокинов и поддерживает модель, в которой липиды, помимо их участия в активации ATM, играют важную и особую роль в ATM. набор персонала.

Накопление банкоматов в жировой ткани — это только часть иммунного ответа на ожирение. Т-клетки также рекрутируются в жировую ткань во время развития ожирения (1, 7–9, 11). Если Т-клетки играют роль в жировой ткани, сравнимую с той, что играет в атеромах, субпопуляции Т-клеток могут регулировать набор и функцию ATM и других миелоидных клеток. Сложность иммунного ответа жировой ткани на метаболические нарушения дополнительно увеличивается из-за неоднородности популяций АТМ.Два крупнейших класса ATM можно выделить на основе экспрессии антигенов F4 / 80, CD11b и CD11c; одна популяция экспрессирует все 3 антигена (клетки FBC), а вторая — только F4 / 80 и CD11b (клетки FB) (46, 47). Представленные здесь данные свидетельствуют о том, что в основном клетки FB накапливаются во время отрицательного энергетического баланса. Это контрастирует с развитием ожирения, когда преобладают клетки FBC, и может объяснить, почему накопление ATM во время ранней потери веса не сопровождается увеличением воспаления жировой ткани и резистентности к инсулину.Онтогенез, функции и, в частности, метаболизм свободных жирных кислот и других липидов отдельных субпопуляционных АТМ еще предстоит определить и, вероятно, предоставят механистическое понимание различий в иммунном ответе на ожирение и потерю веса.

Наши результаты подтверждают модель, в которой липолиз жировой ткани способствует привлечению ATM и захвату липидов (рисунок). Эти данные предполагают, что ATM могут играть роль в сдерживании внеклеточного увеличения концентраций FFA в периоды высокого липолиза и, таким образом, могут защищать локальную функцию адипоцитов.В худом состоянии адипоциты накапливают мало липидов, базальный липолиз ограничен, а банкоматов мало. Когда липолиз активируется и концентрации FFA резко увеличиваются, макрофаги быстро накапливаются в жировой ткани без значительного начального увеличения воспаления. После набора, ATMs фагоцитируют избыток липидов, возможно, снижая стресс адипоцитов. Во время потери веса увеличение потребности в липолизе увеличивает локальную концентрацию FFA и, таким образом, рекрутмент ATM. Однако постепенно, по мере уменьшения запасов триглицеридов и снижения базального липолиза, содержание АТМ снижается.При ожирении избыточное накопление липидов большими адипоцитами увеличивает базальный липолиз и, таким образом, чистое высвобождение FFA. Макрофаги рекрутируются в жировую ткань, но в отличие от потери веса, при которой липолиз в конечном итоге уменьшается, хроническая стимуляция банкоматов приводит к локальному воспалению и изменению метаболической функции.

Методы

Мыши и протокол потери веса.

Самцов мышей C57BL / 6J были получены из лаборатории Джексона в возрасте 9 недель и размещены индивидуально в вентилируемых клетках из оргстекла в пределах барьера, свободного от патогенов, который поддерживает цикл 12 часов света / 12 часов темноты.Мышей кормили диетой с высоким содержанием жиров (D12492; Research Diets Inc.) (подробности о составе рациона см. В дополнительной таблице 1). Пищевые гранулы помещали на кормушки (Wenzel) для повышения точности измерений потребления пищи. Потребление пищи измеряли ежедневно для каждой мыши индивидуально в течение 1 месяца до начала ограничения калорийности. Ограничение калорийности начинали, когда мышей весили 40–41 г. Мы изменили распределение мышей по разным группам с ограничением калорий, чтобы возраст каждой группы существенно не отличался при умерщвлении (дополнительный рисунок 2).Во время ограничения калорийности каждая мышь получала 70% от своего потребления ad libitum (среднее потребление пищи 70% / средний вес). Контрольная постная группа получала стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc.). Для эксперимента по ограничению калорийности высокоуглеводной диеты мышей переводили на D12450B (Research Diets Inc.) (подробности о составе рациона см. В дополнительной таблице 1). Потребление пищи корректировали ежедневно в зависимости от веса мыши. Мышей кормили в начале цикла темноты и света (они получали две трети пищи в темноте и одну треть во время светового цикла.Измерения состава тела проводились с помощью анализатора ЯМР miniSpec TD (Bruker). Образцы крови для измерения исходного уровня инсулина были получены при поднижнечелюстном кровотечении. Уровень глюкозы в крови измеряли с помощью глюкометра FLASH FreeStyle (Abbott). Мышей умерщвляли асфиксией CO ₂ и смещением шейного отдела после 4-часового голодания в течение пятого и шестого часов светового цикла. Образцы сыворотки для окончательных измерений инсулина, свободных жирных кислот и цитокинов собирали путем сердечной пункции.Подкожную брюшную, эпидидимальную, периренальную и брыжеечную жировые ткани иссекали, и правые депо жировой ткани и все брыжеечные депо взвешивали для каждого животного. Образцы тканей замораживали в жидком азоте и хранили при –80 ° C перед экстракцией РНК и иммуногистохимическим анализом. Эксперимент проводился в 2 отдельных случаях ( n = 40 на эксперимент). Все эксперименты на животных были одобрены IACUC Колумбийского университета.

Голодные эксперименты.

Постных мышей C57BL / 6J (возраст от 8 до 9 недель), получавших стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc.), не кормили в течение 24 часов, начиная со второго часа светового цикла. В качестве контроля использовали мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum по весу и возрасту. Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

Для экспериментов натощак на мышах с ожирением, вызванным высокожировой диетой, использовали мышей в возрасте от 24 до 28 недель. Мышей помещали на диету с высоким содержанием жиров (D12492 / Research Diets Inc.) начиная с 6-недельного возраста. Они прошли 24-часовое голодание, начиная со второго часа светового цикла.

Пять 8-недельных мышей Ccr2 ^{— / —} и пять 8-недельных мышей Ccr2 ^{+ / +} (однопометники), получавших стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc. ) голодали в течение 24 часов, начиная со второго часа светового цикла. Пять одинаковых по весу и возрасту мышей Ccr2 ^{— / —} и 5 Ccr2 ^{+ / +} мышей (однопометников) использовали в качестве контроля.Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

CL316,243 для лечения мышей.

Десять 8-недельных мышей C57BL / 6J, получавших стандартную гранулированную диету (см. Выше), вводили внутрибрюшинно 1 мг / кг CL316,243 или физиологического раствора дважды (4 часа между каждой инъекцией). Мышей умерщвляли через 14 часов после второй инъекции. Перигонадную жировую ткань иссекали и образцы хранили, как описано выше.

BrdU для мышей.

Десять 8-недельных мышей C57BL / 6J, получавших стандартную гранулированную диету (см. Выше), вводили внутрибрюшинно 0,133 мг / г BrdU (Sigma-Aldrich) или носитель дважды (3 часа между каждой инъекцией). Через 1,5 часа после первой инъекции мы убрали еду из опытной группы. Контрольную группу кормили без ограничений. Обе группы были принесены в жертву 24 часа спустя. Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

Atgl

^{— / —} и Atgl ^{+ / +} мышей.

Образцы перигонадальной жировой ткани от мышей Atgl ^{+ / +} и Atgl ^{— / —} были собраны у худых мышей в возрасте 8–9 недель, которых кормили ad libitum или голодали в течение 16 часов.

Метаболические анализы.

Уровни инсулина в сыворотке определяли с помощью сверхчувствительного инсулинового ELISA (Mercodia Inc.). PAI-1 и резистин в сыворотке измеряли с использованием панели мышиного адипокина LINCOplex (Millipore). Уровень лептина в сыворотке измеряли с использованием количественного анализа лептина мыши ELISA (системы R&D).FFA измеряли с использованием серии HR NEFA (Wako Diagnostics). Образцы крови для выделения сыворотки собирали после 4-часового голодания в течение пятого и шестого часов светового цикла. Образцы сыворотки, собранные, представленные на рисунке A, также были проанализированы на несколько гормонов и цитокинов и поэтому были помещены на влажный лед перед дальнейшей обработкой. Образцы сыворотки, представленные на рисунке A и рисунке A, использовались только для анализа FFA и были немедленно заморожены в жидком азоте перед анализом (для минимизации липолиза триглицеридов).

Иммуногистохимия.

Образцы жировой ткани фиксировали в течение 48 часов при комнатной температуре в цинк-формалиновом фиксаторе (Anatech Ltd.), инкубировали в 70% этаноле в течение 24 часов и затем заливали парафином. Срезы размером 5 мкм с интервалами 50 мкм помещали на заряженные предметные стекла, депарафинизировали в ксилоле и окрашивали на экспрессию F4 / 80 крысиным моноклональным антителом против F4 / 80 мыши (Abd Serotec). Срезы инкубировали с первичным антителом в течение 80 минут при комнатной температуре (разведение 1: 100).Крысиный IgG2a (Invitrogen) использовали в качестве изотипического контроля (разведение 1:50). Затем использовали биотинилированное вторичное антитело против крыс в разведении 1: 200, затем комплекс Avidin DH: биотинилированная пероксидаза H хрена (Vector Laboratories) и развитие в хромогенном субстрате 3,3′-диаминобензидин (Vector Laboratories). Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Для каждого отдельного депо жировой ткани было проанализировано 5–10 различных мощных полей из каждого из 3 различных срезов. Общее количество ядер и количество ядер клеток, экспрессирующих F4 / 80, подсчитывали для каждого поля.Долю клеток, экспрессирующих F4 / 80, для каждого образца рассчитывали как сумму количества ядер клеток, экспрессирующих F4 / 80, деленное на общее количество ядер в срезах образца. Площадь поперечного сечения определяли для каждого адипоцита в каждом поле с использованием программного обеспечения для анализа изображений Image-Pro Plus (Media Cybernetics Inc.). Для каждой мыши подсчитывали 800–1000 адипоцитов. Число адипоцитов рассчитывали исходя из веса жировой подушечки и объема адипоцитов (48).

Для обнаружения BrdU-положительных клеток готовили срезы, как описано выше, и проводили иммуногистохимию с использованием моноклонального биотинилированного анти-BrdU (набор для окрашивания BrdU; Invitrogen).Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Для каждого отдельного депо жировой ткани было проанализировано 10 различных мощных полей из каждого из 3 различных срезов. Общее количество ядер и количество ядер BrdU-положительных клеток подсчитывали для каждого поля. Долю BrdU-положительных клеток для каждого образца рассчитывали как сумму количества ядер BrdU-положительных клеток, деленную на общее количество ядер в срезах образца.

Для обнаружения CD11c-положительных клеток использовали замороженные срезы (10 мкм).Срезы окрашивали для выявления экспрессии CD11c с помощью хомячкового антитела против CD11c мыши (Abd Serotec). Срезы инкубировали с первичным антителом в течение 60 минут при комнатной температуре (разведение 1: 100). IgG хомяка использовали в качестве изотипического контроля (разведение 1: 100) (Abd Serotec). Затем использовали биотинилированное вторичное антитело против хомяка в разведении 1: 200 (30 минут), затем использовали комплекс Avidin DH: биотинилированная пероксидаза H хрена (Vector Laboratories) и проявили в хромогенном субстрате 3,3′-диаминобензидин (Vector Laboratories). .Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Общее количество ядер и количество CD11c-положительных CLS подсчитывали для каждого поля. Долю CD11c-положительных CLS для каждого образца рассчитывали как сумму количества положительных CLS, деленную на общее количество ядер в срезах образца.

Для двойного иммунофлуоресцентного окрашивания клеток, экспрессирующих F4 / 80 и CD11c, использовали замороженные срезы. Срезы инкубировали с первичными антителами в течение ночи при 4 ° C (разведение 1: 100).Затем добавляли ослиный IgG против Cy3 крысы (Jackson ImmunoResearch) и козий IgG против хомяка Alexa Fluor 488 (Invitrogen). Срезы инкубировали 45 минут при комнатной температуре (разведение 1: 300). Флуоресцентная микроскопия выполнялась с использованием Nikon Eclipse 80i, оснащенного камерой Retiga Exi и системой флуоресцентного освещения X-Cite 120.

Количественная RT-PCR.

РНК экстрагировали из замороженной жировой ткани с использованием кислотно-фенольного реагента (TRIzol; Invitrogen). РНК выделяли из SVC с использованием QIAGEN RNeasy Minikit (QIAGEN) и использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК с использованием обратной транскриптазы Superscript III (Invitrogen) и случайных гексамерных праймеров.Количественные анализы RT-PCR проводили с использованием системных инструментов DNA Engine Opticon 2 (Bio-Rad) и PCR SYBR Green I QuantiTect Master Mix (QIAGEN). Экспрессия мРНК всех указанных генов нормализована к экспрессии гена циклофилина B ( Ppib ). Каждую реакцию проводили в двух экземплярах, и данные анализировали методом 2-DDCT (49). Все использованные праймеры перечислены в дополнительной таблице 3.

Липолиз in vitro изолированной перигонадальной жировой ткани (эксплантаты).

Перигонадные жировые подушечки были удалены хирургическим путем у мышей C57BL / 6J, получавших с высоким содержанием жира ( n = 5 / группа), которые либо кормились ad libitum, либо подвергались ограничению калорийности. Впоследствии их несколько раз промывали PBS. Кусочки ткани (общий вес ~ 100 мг) инкубировали в среде DMEM (Invitrogen), содержащей 2% БСА, не содержащий жирных кислот (Sigma-Aldrich), при 37 ° C. Аликвоты собирали через 120 минут и исследовали на содержание FFA и глицерина. FFA и глицерин измеряли с использованием серии HR NEFA (Wako Diagnostics) и набора для определения свободного глицерина (Sigma-Aldrich) соответственно.Мы измерили количество адипоцитов в параллельных образцах от мышей, получавших ad libitum с одинаковым весом и жиром, и мышей с ограничением калорийности.

Опыты по совместительству.

Чтобы изолировать SVC, перигонадальную жировую ткань выделяли у самцов мышей C57BL / 6J с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, сразу после удушья CO ₂ . Ткани обрабатывали стерильными методами и измельчали ​​на мелкие (<10 мг) кусочки. Для выделения SVC измельченные образцы помещали в DMEM (Invitrogen) с добавлением 10 мг / мл BSA (Sigma-Aldrich).К суспензии ткани добавляли коктейль с обедненной ЛПС коллагеназой (Liberase 3; Roche Applied Science) в концентрации 0,03 мг / мл, и образцы инкубировали при 37 ° C на орбитальном шейкере (3 г ) в течение 45 минут. минут. После завершения разложения образцы пропускали через стерильную нейлоновую сетку 250 мкм (Sefar America Inc.). Суспензию центрифугировали при 500, г, в течение 5 минут. Осажденные клетки собирали в виде SVC. SVC ресуспендировали в буфере для лизиса эритроцитов (BD Biosciences) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 минуты.SVC высевали в концентрации 650 000 клеток / лунку на вкладыши для клеточных культур с размером пор 1 мкм (BD). Каждую вставку помещали в лунку 12-луночного планшета для культуры ткани (BD), содержащего 100 мг тонко измельченной жировой ткани. Чтобы выделить небольшие неповрежденные кусочки жировой ткани для культивирования, перигонадную жировую ткань удаляли у тучных мышей C57BL / 6J, получавших пищу с высоким содержанием жира, и измельчали ​​до кусочков размером примерно 10 мг. SVC совместно культивировали с кусочками жировой ткани в течение 24 часов в среде DMEM, содержащей 10% FBS, 1% пенициллин и 2% BSA, не содержащий жирных кислот.Изопротеренол (Sigma-Aldrich) добавляли в выбранные лунки в концентрации 10 мкмоль / л. Фракцию стромальных сосудов собирали для экспрессии гена или окрашивания масляным красным О через 24 часа.

Окрашивание масляным красным О.

SVC сушили на воздухе и фиксировали цинк-формалиновым фиксатором (см. Выше) в течение 10 минут и окрашивали масляным красным О, как описано ранее (50).

Анализ миграции макрофагов.

BMDM мыши были дифференцированы in vitro из клеток-предшественников костного мозга.Вкратце, клетки костного мозга вымывали из бедренных и большеберцовых костей 9-недельных мышей C57BL / 6J, промывали в DMEM (Invitrogen) и выращивали в течение 7 дней в чашках Петри, содержащих DMEM с 10% FBS, 20% кондиционированных клеток L929. среды, 5% лошадиной сыворотки, 1% глутамина и 1% пирувата натрия. На седьмой день среды заменяли на DMEM, содержащую 10% FBS, 10% среды, кондиционированные клетками L929, 5% лошадиной сыворотки, 1% глутамина и 1% пирувата натрия; макрофаги выращивали еще 3 дня. Дифференциация подтверждена анализом FACS.Миграцию BMDM оценивали с использованием 96-луночного анализа миграции клеток с 5 мкм хемотаксисом QCM (Millipore) в соответствии с инструкциями производителя. В нижнюю камеру добавляли среду, кондиционированную эксплантатом, простую среду или среду, содержащую рекомбинантный MCP-1 (50 нг / мл) (PeproTech). Для получения среды, кондиционированной эксплантами, эксплантаты выделяли от тощих 10-недельных мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от голодных животных инкубировали в базовых условиях, как описано выше, тогда как эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) (Sigma-Aldrich) или без нее.Содержание FFA в эксплантатах оценивали с помощью серии HR NEFA (Wako Diagnostics). Планшеты с миграционной камерой инкубировали в течение 15 часов при 37 ° C в инкубаторе CO ₂ . В конце инкубации клетки детектировали зеленым флуоресцентным красителем (краситель CyQUANT), включенным в анализ. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью Infinite 500 (Tecan). Количество клеток определяли на основании показаний флуоресценции и стандартной кривой.

Препарат клодроната, инкапсулированный в липосомы.

24 мг холестерина и 258 мг фосфатидилхолина (Sigma-Aldrich) растворяли в хлороформе в круглодонной колбе. Хлороформ упаривали при 37 ° C в роторном испарителе в вакууме до образования тонкой липидной пленки. Три грамма клодроната (динатриевая соль дихлорметилендифосфоновой кислоты) (Sigma-Aldrich) растворяли в 15 мл PBS. К липидной пленке добавляли раствор клодронат-PBS или контрольный раствор PBS и встряхивали при 4 г в течение 30 минут.Раствор обрабатывали ультразвуком в течение 10 минут при комнатной температуре в ультразвуковом устройстве с водяной баней (50 Вт). Липосомы центрифугировали при 49 400 g в течение 1 часа и ресуспендировали в 12 мл PBS.

Истощение макрофагов за счет инкапсулированного в липосомы клодроната.

Клодронат, инкапсулированный в липосомы, вводили внутрибрюшинно мышам C57BL / 6J. Каждая мышь получала липосомы, содержащие 115 мг / кг клодроната или эквивалентный объем липосом, содержащих PBS.Мышей не кормили в течение 24 часов, начиная с 3 дня после инъекции, и истощение макрофагов в перигонадной жировой ткани было подтверждено в конце периода голодания (день 4). Для экспериментов in vitro перигонадные жировые подушечки удаляли хирургическим путем у мышей C57BL / 6J, получавших пищу с высоким содержанием жира ( n = 4 / группа), которые не голодали в течение 24 часов. Впоследствии их несколько раз промывали PBS. Кусочки ткани (общий вес ~ 75 мг) инкубировали в среде DMEM (Invitrogen), содержащей 1% антибиотиков, без добавления сыворотки.Через 6 часов в свежую среду добавляли 20% липосом, содержащих либо клодронат, либо PBS, до конечного объема 1 мл. Эксплантаты выдерживали 48 часов при 37 ° C в инкубаторе CO ₂ . Затем среды, содержащие липосомы, перемещали и добавляли DMEM, содержащую 2% БСА без жирных кислот (Sigma-Aldrich). Аликвоты собирали через 120 минут и исследовали на содержание глицерина. Глицерин измеряли с помощью набора для определения свободного глицерина (Sigma-Aldrich). Эксплантаты также использовали для выделения РНК.

Статистика.

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Все значения P были рассчитаны с использованием двухстороннего распределения, двухвыборочного теста с неравной дисперсией t Стьюдента. Все расчеты были выполнены с использованием Microsoft Excel и Statistica (Statsoft Inc.).

Потеря веса и липолиз способствуют динамическому иммунному ответу в жировой ткани мышей

Резюме

Ожирение вызывает иммунный ответ, характеризующийся привлечением миелоидных клеток к ключевым органам обмена веществ, включая жировую ткань.Однако реакция иммунных клеток на непатологические метаболические стимулы менее изучена, а факторы, регулирующие метаболически-зависимое накопление иммунных клеток, изучены не полностью. Здесь мы охарактеризовали реакцию макрофагов жировой ткани (ATM) на потерю веса и голодание у мышей и определили роль липолиза в рекрутинге и накоплении ATM. Мы обнаружили, что иммунный ответ на потерю веса был динамичным; ограничение калорийности мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, привело к первоначальному увеличению набора ATM, тогда как содержание ATM снизилось после продолжительного периода потери веса.Пик числа АТМ совпал с пиком циркулирующих концентраций СЖК и липолиза жировой ткани, что позволяет предположить, что липолиз вызывает накопление АТМ. Действительно, голодание или фармакологически индуцированный липолиз быстро увеличивал накопление ATM, активность хемоаттрактанта жировой ткани и захват липидов ATM. И наоборот, диетические и генетические манипуляции, снижающие липолиз, уменьшали накопление АТМ. Истощение макрофагов в культурах жировой ткани увеличивает экспрессию липазы триглицеридов жиров и генов, регулируемых FFA, и увеличивает липолиз.Эти данные предполагают, что локальные липидные потоки являются центральными регуляторами рекрутирования ATM и что после рекрутирования ATMs образуют нагруженные липидами макрофаги, которые могут буферизовать локальное повышение концентрации липидов.

Введение

Ожирение активирует сложную иммунную программу, центральными особенностями которой являются дифференциация, активация и рекрутирование лимфоидных и миелоидных клеток в ключевые метаболические ткани (1–11). У млекопитающих увеличение массы жировой ткани вызывает накопление макрофагов жировой ткани (ATM), которые продуцируют провоспалительные молекулы, включая TNF-α, SAA3 и CCL2 (MCP-1) (2, 12).Банкоматы способствуют как местному, так и системному воспалению и модулируют метаболические фенотипы, включая резистентность к инсулину (13). Генетические и фармакологические манипуляции, которые уменьшают содержание АТМ или изменяют их воспалительное состояние у тучных грызунов, модулируют местное воспаление и связаны со снижением инсулинорезистентности (14). Например, дефицит или антагонизм Ccr2 снижает рекрутирование ATM и частично защищает мышей от инсулинорезистентности, вызванной ожирением (15). Сходным образом, миелоидная клеточно-специфическая делеция IKK-β, регулирующая воспалительный путь, снижает вызванное ожирением воспаление и индуцированную диетой инсулинорезистентность (6, 16).

Метаболические факторы, регулирующие иммунный ответ на ожирение и накопление макрофагов и других иммунных клеток в жировой ткани, остаются плохо изученными. У людей со стабильным весом и грызунов или тех, кто набирает вес, существует сильная положительная корреляция между размером адипоцитов и содержанием АТМ (2, 17, 18). Эта корреляция предполагает, что накопление макрофагов происходит в ответ на процесс, связанный с увеличением объема адипоцитов. Cinti и его коллеги предположили, что некротическая гибель адипоцитов, которая, по их гипотезе, вызвана гипертрофией и ускоряется ожирением, является основным стимулом, регулирующим накопление АТМ (19).Действительно, массивный апоптоз адипоцитов в трансгенной модели индуцибельной липоатрофии приводит к быстрому накоплению ATM (20) и предполагает, что гибель адипоцитов может управлять накоплением ATM. Однако недавние исследования показывают, что скорость гибели адипоцитов не увеличивается у лиц с ожирением (21). Другая убедительная гипотеза заключается в том, что гипоксия влияет на набор сотрудников банкоматов. В этой модели гипертрофия адипоцитов создает области микрогипоксии, которые активируют воспалительные программы, важные для ремоделирования сосудистой сети.Эти пути включают регулируемое JNK1 высвобождение хемокинов (22-24). Однако в недавнем исследовании экспрессия в жировой ткани Hif1a , основного фактора, опосредующего реакцию гипоксии, и Vegfa , ключевой нижестоящей мишени Hifa , отрицательно коррелировала с содержанием ATM (17).

Увеличение массы жировой ткани и объема адипоцитов имеет другие широкие метаболические последствия, включая снижение функции митохондрий, повышенный стресс ER, нарушение передачи сигналов инсулина и более высокую скорость базального липолиза (25–28).Ключ к разгадке функции ATM и их регуляции может быть получен из наблюдения, что с увеличением ожирения ATMs образуют многоядерные синцитии, содержащие большие липидные капли (19, 29), что позволяет предположить, что при ожирении ATMs фагоцитируют или поглощают избыток липидов. Тесная связь размера адипоцитов с накоплением макрофагов и захватом липидов предполагает, что избыток липидов может иметь решающее значение для накопления ATM. Поэтому мы предположили, что иммунная система и макрофаги напрямую реагируют на изменения в метаболической функции и потоках субстратов, и, в частности, что вызванное ожирением увеличение базального липолиза (в силу увеличения объема жировых клеток) (25) увеличит локальные концентрации внеклеточных липидов и приведет к возникновению АТМ. накопление.В соответствии с этой гипотезой депо висцеральной жировой ткани — по сравнению с подкожными депо брюшной полости — имеют повышенную базальную скорость липолиза и содержат больше банкоматов (18, 30, 31). Если усиленный липолиз вызывает накопление АТМ, то изменение липолиза должно изменить накопление АТМ предсказуемым образом. Общий липолиз представляет собой сумму (а) базального липолиза, который в значительной степени определяется содержанием триглицеридов в адипоцитах, и (б) липолиза по требованию, который представляет собой гормонально регулируемое высвобождение FFA в ответ на потребности в питании.Ожирение увеличивает размер адипоцитов и, следовательно, базальный липолиз. Отрицательный энергетический баланс приводит к мобилизации запасов триглицеридов жировой ткани и активирует липолиз по требованию; следовательно, у лиц с ожирением во время ранней потери веса, когда содержание триглицеридов в адипоцитах остается высоким, как базальный, так и требуемый липолиз высоки, и, если наша гипотеза верна, содержание ATM должно быть повышено.

Несмотря на то, что были проведены подробные исследования накопления макрофагов в жировой ткани во время набора веса, кинетика накопления АТМ во время похудания остается плохо определенной.Постоянное увеличение веса и массы жировой ткани приводит к пропорциональному увеличению содержания АТМ (2, 5, 18). После стойкой потери веса содержание макрофагов снижается (32). Однако наша гипотеза предсказывает, что достижение отрицательного энергетического баланса за счет увеличения липолиза потребности должно нарушить корреляцию между массой жировой ткани / объемом адипоцитов и содержанием макрофагов во время ранней потери веса, когда объем адипоцитов и базальный липолиз существенно не снижаются, но потребность в липолизе высока.

Чтобы определить, влияет ли липолиз, вызванный потерей веса, накопление АТМ в жировой ткани, мы измерили содержание АТМ у мышей с ожирением, получавших пищу с высоким содержанием жира, которым проводилось умеренное ограничение калорийности, и контролировали кинетику накопления макрофагов в течение 2-месячного периода. Мы непосредственно определили, увеличивает ли накопление АТМ липолиз жировой ткани натощак и фармакологически. Напротив, мы снизили скорость липолиза жировой ткани за счет изокалорийного замещения углеводов пищевым жиром и изучили эффекты голодания у мышей с дефицитом Atgl / Pnlap2 , чтобы оценить, снижает ли снижение липолиза накопление ATM.Мы изучили эффекты индуцирования липолиза на банкоматах in vivo и в интактной жировой ткани in vitro, чтобы определить, активирует ли липолиз сам по себе захват FFA банкоматами. Наконец, мы удалили макрофаги из жировой ткани in vitro и обнаружили, что в отсутствие ATM экспрессия липазы Atgl / Pnpla2 и липолиз в жировой ткани увеличиваются. Наши результаты подтверждают модель, в которой липолиз жировой ткани приводит к накоплению АТМ и рекрутированным макрофагам в буфер, локальное увеличение концентрации липидов за счет фагоцитоза и, возможно, за счет модуляции метаболизма адипоцитов.

Результаты

Потеря веса вызывает кратковременное скопление банкоматов.

Чтобы понять, как иммунная система — и в частности банкоматы — реагирует на потерю веса, мы охарактеризовали метаболический и воспалительный фенотипы мышей с ожирением, которые подвергались умеренному ограничению калорийности. Девятинедельных самцов мышей C57BL / 6J кормили диетой с высоким содержанием жиров (60% калорий приходилось на жир; дополнительная таблица 1; дополнительные материалы доступны в Интернете вместе с этой статьей; doi: 10.1172 / JCI42845DS1), пока они не достигнут массы тела 40 граммов. Затем эти животные были подвергнуты ограничению калорийности (они получали 70% корма ad libitum), чтобы вызвать постепенную потерю веса. Мышей умерщвляли и собирали ткани через 0, 3, 7, 14, 21, 42 и 60 дней ограничения калорийности. Группа мышей соответствующего возраста, получавших постную пищу, была изучена в качестве контроля (дополнительный рисунок 1A). В начале ограничения калорийности все мыши, получавшие диету с высоким содержанием жиров, имели одинаковый состав тела, уровень глюкозы в крови натощак и концентрации инсулина в сыворотке (дополнительная таблица 2).Мы чередовали распределение мышей по разным группам ограничения калорийности, гарантируя, что средний возраст каждой умерщвленной группы существенно не отличался (дополнительный рисунок 2A). Как и ожидалось, этот протокол умеренного ограничения калорийности вызывал постепенное снижение веса и жировой массы без значительного влияния на мышечную массу (дополнительный рисунок 1, B и C и дополнительный рисунок 2B). Общая жировая масса, измеренная с помощью ЯМР-спектроскопии, заметно снизилась к 14 дню. Мыши продолжали терять вес на протяжении всего вмешательства, и в конце ограничения калорийности они потеряли 27.9% от их исходной массы тела (40,8 ± 0,3 г против 29,4 ± 3,8 г; P <0,001). Все жировые отложения уменьшались в массе с одинаковой скоростью (дополнительный рисунок 1D), и уменьшение жировой массы было связано с уменьшением размера адипоцитов, а не с уменьшением количества адипоцитов (дополнительный рисунок 1, C – F). Уменьшение размера адипоцитов, как и ожидалось, сопровождалось снижением экспрессии гена лептина и концентрации лептина в сыворотке (дополнительные рисунки 3, A и B).

Во время набора веса и в поперечных исследованиях людей со стабильным весом наблюдается положительная, почти линейная зависимость между ожирением и маркерами местного и системного воспаления (13).После потери веса примерно на 17% у пациентов через 3 месяца после бариатрической операции содержание АТМ и воспаление жировой ткани уменьшаются, а чувствительность к инсулину улучшается (32, 33). Однако исследований связи между ожирением и показателями воспаления во время динамической потери веса было немного. Недавнее исследование Лангина и его коллег предполагает, что во время ранней потери веса у людей экспрессия воспалительных генов не снижается (34).

Чтобы обеспечить большее временное разрешение взаимосвязи между ожирением и метаболическими и воспалительными фенотипами во время похудания, мы измерили уровень глюкозы в крови натощак, сывороточный инсулин и экспрессию воспалительных генов в жировой ткани в нашей когорте мышей в течение 2 месяцев непрерывной потери веса.Концентрации глюкозы в крови натощак и сывороточного инсулина оставались повышенными в течение первой недели потери веса, но после этого значительно снизились, одновременно со снижением процента жира в организме (дополнительный рисунок 4). Напротив, снижение экспрессии воспалительных генов в перигонадной жировой ткани не было равномерным, и несколько классов генов были идентифицированы на основе их характера экспрессии во время потери веса. Экспрессия некоторых воспалительных генов, таких как Saa3 , снизилась на ранних этапах потери веса, что предшествовало улучшению гомеостаза глюкозы, тогда как экспрессия других прототипных воспалительных генов M1, включая Tnf ( Tnfa ), оставалась повышенной в течение всего периода. когда животные находились в отрицательном энергетическом балансе (дополнительный рисунок 5).Циркулирующие воспалительные белки также подразделяются на несколько классов в ответ на отрицательный энергетический баланс, при этом концентрации некоторых воспалительных молекул, например резистина, рано падают во время потери веса и до улучшения метаболизма, в то время как концентрации других, например, PAI-1 оставался неизменным во время ограничения калорийности и потери веса (дополнительный рисунок 3, C и D).

В отличие от других классов генов, экспрессия в жировой ткани специфичных для макрофагов / миелоидных клеток генов Emr1 (F4 / 80), Cd68 и Csf1r увеличивалась после 3 дней ограничения калорийности (Рисунок A ).Однако к 60 дням потери веса экспрессия Emr1 и Cd68 снижалась до уровней ниже тех, которые присутствовали до начала потери веса. Позднее снижение экспрессии генов, специфичных для макрофагов, согласуется с предыдущими исследованиями, в которых изучались эффекты долгосрочной потери веса. Чтобы определить, было ли начальное увеличение и окончательное снижение экспрессии генов, специфичных для макрофагов / миелоидов, связано с изменениями экспрессии генов или с изменением количества макрофагов, мы провели иммуногистохимию с использованием антитела, которое распознает антиген макрофагов F4 / 80 (EMR1).В соответствии с исследованиями экспрессии генов, количество макрофагов в перигонадной жировой ткани увеличивалось в течение первой недели потери веса. Через три дня после начала ограничения калорийности в перигонадальной жировой ткани было на 47% больше макрофагов, чем в жировой ткани контрольных мышей, получавших ad libitum (процент макрофагов на общее количество клеток: 38,6% ± 4,1% против 26,3% ± 7,4%; P <0,01; Рисунок, B и C). Мы и другие ранее показали, что существует сильная положительная корреляция между ожирением и содержанием банкоматов (2, 18).Однако при похудании эта связь теряется. Вместо этого во время начального периода потери веса (дни 0–7 в нашем исследовании) у более стройных мышей обнаруживается больше банкоматов (рисунок D), тогда как позже, во время потери веса, обнаруживается более типичная положительная корреляция (рисунок D). Идентичные отношения были обнаружены при построении графика зависимости содержания АТМ от размера адипоцитов (данные не показаны). Банкоматы, в частности банкоматы CD11c ⁺ и короноподобные структуры (CLS) CD11c ⁺ , наиболее тесно связаны с воспалением жировой ткани и системной инсулинорезистентностью.Почти все клетки CD11c ⁺ в перигонадальной жировой ткани мышей во время ранней потери веса также были F4 / 80 ⁺ (CD11c ⁺ ATM) (дополнительная фигура 6). Хотя общее количество банкоматов увеличивалось во время ранней потери веса, количество банкоматов CD11c ⁺ и CLS не увеличивалось (дополнительный рисунок 7), что соответствует накоплению популяции банкоматов CD11c ^— во время ранней потери веса и отсутствию увеличения маркеров воспаления или нарушения инсулинорезистентности в этот же период (дополнительные рисунки 4 и 5).

При похудании содержимое банкомата увеличивается, затем уменьшается.

( A ) Экспрессия генов, кодирующих миелоидно-макрофагальные белки в перигонадальной жировой ткани. Черные столбцы представляют мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые подвергались ограничению калорийности в течение различных интервалов времени. Белые столбики представляют контрольных худых мышей, которых кормили пищевой диетой (CD) и которые не подвергались ограничению калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в перигонадальных срезах жировой ткани мышей во время потери веса после указанного количества дней ограничения калорийности.Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( C ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадальной жировой ткани. n = 5–6 мышей / группа. ( D ) Взаимосвязь между содержанием макрофагов и массой тела у мышей в течение первых 7 дней потери веса (левая панель) и в течение 14-60 дней потери веса (правая панель). Показаны квадратные значения коэффициентов корреляции Пирсона. Каждая точка данных представляет собой% макрофагов в перигонадальной жировой ткани мышей при разном весе тела во время ограничения калорийности.( E ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в срезах подкожной жировой ткани. Масштабные линейки: 50 мкм. ( F ) Макрофаги в процентах от всех клеток подкожной жировой ткани мышей во время потери веса. n = 5–6 мышей / группа. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 по сравнению с днем ​​0.

Раннее первоначальное увеличение содержания АТМ не было уникальным для перигонадальной жировой ткани.В соответствии с предыдущими данными у мышей с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров, в подкожной жировой ткани содержание ATM было ниже, чем в перигонадной жировой ткани (2, 32). Однако после 3 дней ограничения калорий содержание АТМ удвоилось в подкожных депо (макрофаги в процентах от всех клеток: 10,0 ± 3,1% против 20,2 ± 7,4%; P <0,05; Рисунок, E и F) . Как в перигонадных, так и в подкожных депо количество АТМ постепенно уменьшалось после 3 дней отрицательного энергетического баланса, так что после 42 дней ограничения калорий содержание АТМ было значительно ниже, чем в жировой ткани мышей с высоким содержанием жира, которые никогда не ограничивались калорийностью ( Рисунок, B, C, E и F).

Было высказано предположение, что во время набора веса накопление АТМ вызвано некрозом адипоцитов, ремоделированием ткани или микрогипоксией. Первоначальное увеличение ATM в ответ на потерю веса не было связано со снижением количества адипоцитов, как можно было бы ожидать, если некроз адипоцитов приводил к накоплению ATM (дополнительный рисунок 1F). Также пик в ATM не совпал с активацией транскрипционной программы ремоделирования жировой ткани (дополнительный рисунок 8).

Показатели липолиза коррелируют с содержанием АТМ.

Первоначальное увеличение количества банкоматов было связано с изменениями в концентрации циркулирующих FFA и показателями липолиза. Базальный липолиз в жировой ткани — это высвобождение FFA из адипоцитов, которое происходит при отсутствии отрицательного энергетического баланса. Базальный липолиз увеличивается в жировой ткани у лиц с ожирением и положительно коррелирует с размером адипоцитов (25). Липолиз по требованию — это гормонально и автономно управляемое высвобождение FFA из триглицеридов адипоцитов, которое активируется отрицательным энергетическим балансом, когда FFA мобилизуются из жировой ткани для системного использования в качестве субстратов (25).Модель, в которой липолиз регулирует накопление АТМ, согласуется с предыдущими наблюдениями за людьми со стабильным весом или набором веса: у тучных мышей с большими адипоцитами наблюдается более высокий базальный липолиз жировой ткани и большее содержание АТМ, чем у тощих животных. Во время ранней потери веса, когда размер адипоцитов существенно не изменился, базальный липолиз остается высоким, а потребность в липолизе увеличивается, и, таким образом, мы прогнозируем чистое увеличение общего липолиза. Но по мере уменьшения массы жировой ткани и размера адипоцитов базальный липолиз также уменьшается, и чистый отток липидов из жировой ткани уменьшается.Концентрации FFA в сыворотке коррелируют с общей скоростью липолиза и потоками жирных кислот в жировой ткани (25, 35). Следовательно, если липолиз действительно играет роль в накоплении ATM, мы предсказали, что FFA в сыворотке будет коррелировать с содержанием ATM у наших мышей с ограничением калорийности. Действительно, сывороточные концентрации FFA были выше на 3-й день ограничения калорий, до значительной потери веса, и совпадали с пиком содержания макрофагов (Рисунок A). В соответствии с нашей гипотезой существовала положительная корреляция между концентрацией FFA в сыворотке и процентом ATM в перигонадной жировой ткани на протяжении всего периода ограничения калорийности (Рисунок B).

Показатели липолиза коррелируют с содержанием АТМ.

( A ) Концентрации FFA в сыворотке во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. Черные столбцы представляют мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые подвергались ограничению калорийности в течение различных интервалов времени. Белая полоса представляет контрольных худых мышей, которых кормили кормовой диетой и которые не подвергались ограничению калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Корреляция содержания макрофагов (% макрофагов) и концентрации FFA в сыворотке у мышей во время потери веса; показано квадратное значение коэффициента корреляции Пирсона. n = 5–6 мышей / группа. Каждая точка данных представляет собой% макрофагов в перигонадальной жировой ткани мыши при различных концентрациях FFA в сыворотке. ( C ) Экспрессия в перигонадной жировой ткани гена, кодирующего липазу ATGL, у мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. n = 5–6 мышей / группа. ( D ) Высвобождение FFA из эксплантатов перигонадальной жировой ткани, инкубированных в базовых условиях. Эксплантаты были изолированы от мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или которые подвергались ограничению калорийности в течение 3 или 42 дней.( E ) Высвобождение глицерина из эксплантатов перигонадной жировой ткани, инкубированных в базовых условиях. Эксплантаты были изолированы от мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или которые подвергались ограничению калорийности в течение 3 или 42 дней. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05 по сравнению с днем ​​0.

В жировой ткани стадия ограничения скорости как базального липолиза, так и липолиза по потребности регулируется ферментом, кодируемым Atgl / Pnpla2 . Экспрессия Atgl / Pnpla2 регулируется нутритивным статусом и тесно коррелирует со скоростью липолиза жировой ткани (36).В соответствии с пиком липолиза жировой ткани на 3-й день ограничения калорийности экспрессия в жировой ткани Atgl / Pnpla2 увеличивалась на 3-й день ограничения калорийности и возвращалась к исходному уровню на 42-й день (Рисунок C). Напротив, экспрессия гормоночувствительной липазы, кодируемой Hsl / Lipe , не коррелирует со статусом питания. Hsl / Lipe уровни мРНК подавляются во время острого голодания и повышаются только после длительного голодания (36).В соответствии с этими данными, мы не наблюдали никаких изменений в уровнях Hsl / Lipe во время ограничения калорийности (дополнительный рисунок 9A).

Циркулирующие концентрации FFA и экспрессия Atgl / Pnpla2 обеспечивали косвенные измерения липолиза жировой ткани. Для прямого измерения липолиза в жировой ткани во время ограничения калорийности скорости высвобождения неэтерифицированных FFA и глицерина измеряли в перигонадальной жировой ткани мышей во время ограничения калорийности.В соответствии с нашими косвенными измерениями, липолиз увеличивался в жировой ткани мышей после 3 дней ограничения калорий по сравнению с жировой тканью мышей, получавших ad libitum (рисунок, D и E). Высвобождение FFA и глицерина снизилось через 42 дня. Эти данные демонстрируют положительную корреляцию между липолизом жировой ткани и содержанием АТМ. Чтобы напрямую определить, влияет ли увеличение или уменьшение липолиза на накопление АТМ, мы провели ряд диетических, фармакологических и генетических манипуляций.

Липолиз вызывает накопление АТМ.

Если липолиз вызывает накопление ATM в жировой ткани, то голодание, которое быстро увеличивает гидролиз триглицеридов жировой тканью, также должно увеличивать содержание ATM. Перигонадную жировую ткань собирали у мышей C57BL / 6J с ожирением, получавших пищу с высоким содержанием жира, которые либо голодали в течение 24 часов, либо кормились ad libitum. Голодание вызывало увеличение концентрации FFA в сыворотке (рис. A) и приводило к быстрому накоплению ATM. По сравнению с жировой тканью мышей, получавших ad libitum, жировая ткань голодных мышей содержала на 65% больше ATM (процент макрофагов на общее количество клеток: 22.9% ± 6% против 37,9% ± 3,5%; P <0,01; Рисунок, Б – Г). Накопление АТМ, вызванное голоданием, не ограничивалось тучными мышами. У худых мышей экспрессия генов, специфичных для макрофагов, Emr1 и Csf1r , увеличивалась в 3 и 4 раза соответственно после 24-часового голодания (Рисунок E). В соответствии с нашими наблюдениями, что ограничение калорийности не вызывает накопление CD11c ⁺ ATM, экспрессия Itgax ( Cd11c ) не изменяется при голодании (Рисунок E).

Индукция липолиза увеличивает содержание макрофагов в жировой ткани.

( A ) Концентрации FFA в сыворотке у мышей с ожирением ad libitum, получавших пищу ad libitum и голодавших 24 часа в сутки, вызванных диетой с высоким содержанием жиров. n = 5–6 мышей / группа. ** P <0,01 по сравнению с кормлением ad libitum (кормление Ad lib). ( B и C ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1), в перигонадальных срезах жировой ткани из индуцированного диетой с высоким содержанием жиров ожирения ad libitum ( B ) и мышей, голодавших 24 часа (). С ).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( D ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадной жировой ткани от мышей с ожирением ad libitum, получавших пищу ad libitum и голодавших 24 часа натощак, вызванного диетой с высоким содержанием жиров. n = 5–6 мышей / группа. ** P <0,01 по сравнению с кормлением ad libitum. ( E ) Экспрессия генов, кодирующих белки, специфичные для миелоидных макрофагов, у мышей, получавших постное питание ad libitum и голодавших 24 часа в сутки. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05 по сравнению с кормлением ad libitum.( F ) Протокол фармакологически индуцированного липолиза адипоцитов с помощью β3-адренергического агониста (CL316,243) у худых мышей. ( G — I ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1) в перигонадальных срезах жировой ткани от тощих мышей, получавших носитель ( G ) или CL316 243 ( H и I ) ). Многоядерные гигантские клетки, содержащие липидные капли, видны на некоторых участках ( I ). Стрелки указывают банкоматы.Масштабные линейки: 50 мкм. ( J ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадальной жировой ткани от мышей, обработанных носителем и CL316,243. n = 5 мышей / группа. *** P <0,001 по сравнению с носителем. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Активация β3-адренергического рецептора ( Adrb3 ), который у мышей почти исключительно экспрессируется адипоцитами, увеличивает липолиз адипоцитов. Граннеман и его коллеги ранее отмечали, что β3-адренергическая стимуляция приводит к накоплению миелоидных клеток в жировой ткани (37).Чтобы определить, будет ли фармакологическая активация липолиза увеличивать накопление ATM, мы дважды вводили мышам C57BL / 6J (масса тела = 24,5 ± 0,8 г) β3-адренергический агонист CL316,243 с интервалом в 4 часа. Депо жировой ткани собирали через 14 часов после последней инъекции (Рисунок F). По сравнению с контрольными мышами, фармакологическая индукция липолиза быстро увеличивала содержание ATM в перигонадальной жировой ткани более чем в 5 раз, до уровней, типичных для мышей с ожирением (рисунок, G – J).Макрофаги были видны как по отдельности, так и в скоплениях (Рисунок, G – I). Таким образом, среди гормональных сигналов, активируемых голоданием, β3-адренергическая индукция липолиза адипоцитов достаточна для индукции быстрого рекрутирования макрофагов. Подобно нашим наблюдениям при ранней потере веса и голодании, рекрутированные β3-адренергическими агентами макрофаги не увеличивают воспалительный фенотип жировой ткани (дополнительный рисунок 9E).

Уменьшение липолиза во время похудания или голодания снижает накопление АТМ.

Если наша гипотеза верна, то манипуляции, ингибирующие липолиз во время раннего похудания или голодания, должны уменьшить или предотвратить накопление АТМ. Хотя диета с высоким содержанием жиров увеличивает количество пищевых липидов, они также являются кетогенными при отрицательном энергетическом балансе. По сравнению с диетами с высоким содержанием жиров при отрицательном энергетическом балансе, диеты с высоким содержанием углеводов увеличивают соотношение циркулирующего инсулина / глюкагона и снижают мобилизацию липидов и скорость липолиза в жировой ткани (38). Поэтому мы повторили интервенцию по ограничению калорийности, добавив группу мышей соответствующего веса, которые были ограничены в калориях на изокалорийной высокоуглеводной диете (дополнительная таблица 1).Мышей поддерживали ограничение калорийности в течение 3 дней, и мышей в обеих группах в равной степени ограничивали (на 30% меньше калорий, чем их потребление ad libitum). В конце ограничения калорийности не было никакой разницы в весе между группами с ограничением калорийности диеты с высоким содержанием углеводов и с высоким содержанием жиров. Однако, как и ожидалось, концентрация FFA в сыворотке мышей с ограничением калорийности рациона с высоким содержанием углеводов была на 36% ниже, чем у мышей с ограничением калорийности рациона с высоким содержанием жиров (0,38 ± 0,11 против 0.59 ± 0,07 ммоль / л; P <0,05) (Рисунок A). В соответствии с нашей гипотезой, во время потери веса содержание АТМ было на 35% ниже (31,1% ± 4,1% против 20,1% ± 5,2%; P <0,05) в перигонадальной жировой ткани у мышей, получавших высокоуглеводную диету, по сравнению с таковыми. питались диетой с высоким содержанием жиров (Рисунок, B и C).

Ингибирование липолиза посредством диетических манипуляций ограничивает накопление АТМ во время ранней потери веса.

Протокол ограничения калорийности использовался для индукции потери веса с более низкой скоростью липолиза по сравнению с ограничением калорийности мышей на диете с высоким содержанием жиров.Мышей с ожирением, вызванным высокожировой диетой, кормили 70% калорий ad libitum в течение 3 дней в виде диеты с высоким содержанием углеводов или жиров. ( A ) Сыворотка FFA у мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности диеты с высоким содержанием жиров или углеводов. n = 5–6 мышей / группа. ( B ) Срезы перигонадной жировой ткани мышей во время потери веса, вызванной диетой с высоким содержанием жиров (левая панель) или высоким содержанием углеводов (правая панель).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 50 мкм. ( C ) Макрофаги в процентах от всех клеток в перигонадной жировой ткани мышей во время потери веса, вызванной ограничением калорийности диеты с высоким содержанием жиров или углеводов. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05, по сравнению с ограничением калорий на HFD. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Жировая триглицерид липаза (также известная как деснутрин или протеин 2, содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы) ( Atgl / Pnpla2 ) регулирует как базальный, так и необходимый липолиз в жировой ткани.Животные с дефицитом ATGL / PNPLA2 серьезно нарушены в их способности мобилизовать FFA, имеют очень низкий базальный липолиз и неспособны повышать потребность в липолизе в ответ на голодание, несмотря на сохранность гормонального и вегетативного ответа на голодание (36). Чтобы предоставить генетические доказательства того, что липолиз является критическим детерминантом содержания ATM, мы изучили эффекты голодания на мышах Atgl / Pnpla2 ^{— / —} . В соответствии с нашей гипотезой, мы обнаружили, что в неограниченном количестве — мышей Atgl / Pnpla2 ^{— / —} имели менее 3% банкоматов и что после голодания не было увеличения количества банкоматов (рисунок, A и B). или экспрессия генов, специфичных для макрофагов (рис. C).Эти данные свидетельствуют о том, что липаза ATGL / PNPLA2 необходима для рекрутирования и накопления ATM в жировой ткани.

Дефицит ATGL / PNPLA2 ограничивает накопление в банкоматах во время голодания.

( A ) Иммуногистохимическое окрашивание макрофагов, экспрессирующих F4 / 80 (EMR1) в перигонадальных срезах жировой ткани из Atgl ^{+ / +} (верхняя панель) и Atgl ^{— / —} (нижняя панель) мышей, которых кормили ad libitum (слева) или голодали (справа).Стрелки указывают банкоматы. Масштабные линейки: 100 мкм. ( B ) Макрофаги в процентах от всех клеток у мышей Atgl ^{+ / +} , получавших постное питание ad libitum, и мышей Atgl ^{— / —} , получавших голодание. n = 4–5 мышей / группа. *** P <0,001 по сравнению с кормлением ad libitum. ( C ) Экспрессия генов, специфичных для макрофагов, в перигонадальной жировой ткани мышей Atgl ^{— / —} , получавших без ограничений и голодавших без пищи. n = 4–5 мышей / группа. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Липолиз жировой ткани вызывает миграцию макрофагов.

Скорость митоза в жировой ткани голодных мышей была очень низкой (<2%) и не отличалась от скорости митоза в жировой ткани у мышей, получавших ad libitum (дополнительные рисунки 9, B и C), что позволяет предположить, что липолиз -зависимое увеличение ATM было не из-за пролиферации, а следствием рекрутирования миелоидных клеток. Чтобы определить, увеличивает ли липолиз высвобождение хемоаттрактантов жировой ткани для макрофагов, мы выполнили анализ миграции с эксплантатами жировой ткани от голодных и получающих неограниченное питание мышей.Эксплантаты перигонадальной жировой ткани собирали у тощих мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали в базовых условиях или с добавлением изопротеренола для индукции липолиза. Как и ожидалось, по сравнению с жировой тканью, выделенной от мышей, получавших ad libitum, жировая ткань от голодных мышей или жировая ткань, обработанная изопротеренолом, увеличивала липолиз, о чем свидетельствует увеличение высвобождения FFA (Рисунок A). При таком увеличении липолиза пропорционально увеличивалась хемотаксическая активность жировой ткани по отношению к макрофагам, происходящим из костного мозга (BMDM).Это увеличение активности хемоаттрактанта жировой ткани было сопоставимо с таковым, индуцированным MCP-1 / CCL2 (Рисунок B). Мы также обнаружили, что в отличие от голодных мышей дикого типа, голодные CCR2-дефицитные мыши не увеличивали экспрессию генов, специфичных для макрофагов (дополнительная фигура 9D). Однако не наблюдалось увеличения экспрессии в жировой ткани известных лигандов CCR2 во время голодания (данные не показаны). Эти данные согласуются с набором банкоматов во время быстрого многоступенчатого процесса, в котором накопление предшественников ATM в кровотоке зависит от CCR2, но для перехода в депо жира действительно требуется CCR2 или его лиганд.

Липолиз вызывает миграцию макрофагов.

Эксплантаты перигонадальной жировой ткани выделяли от тощих мышей, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от голодных животных инкубировали в базовых условиях, тогда как эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) или без нее. ( A ) Концентрацию FFA измеряли в среде, кондиционированной эксплантатом. ( B ) Хемотаксическую активность контрольной среды, среды с добавлением MCP-1 / CCL2 (50 нг / мл) и среды, кондиционированной эксплантатом, измеряли с использованием стандартного анализа миграции для BMDM.Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 4, 5–8 повторностей на образец. * P <0,05; ** P <0,01.

Снижение веса и липолиз активируют программу поглощения липидов банкоматами.

Основная функция макрофагов — фагоцитоз тканеспецифических продуктов таким образом, чтобы поддерживать гомеостаз ткани. Например, в кости, остеокласте (многоядерный макрофаг кости) резорбция матрикса необходима для поддержания здоровья кости (39).По аналогии, накопление ATM в периоды повышенного липолиза может способствовать поглощению или фагоцитозу избыточных местных липидов и участвовать в обмене липидов в жировой ткани. Действительно, отличительной особенностью АТМ при ожирении является накопление внутриклеточных липидов (19, 29). В жировой ткани людей с ожирением есть банкоматы с множеством липидных капель и другие, которые образуют многоядерные гигантские клетки, содержащие большие одноглазные капли. В соответствии с основной функцией АТМ, заключающейся в поглощении липидов в периоды повышенного высвобождения FFA из адипоцитов, экспрессия в жировой ткани 2 рецепторов транспорта липидов макрофагов, Cd36 и Msr1 , увеличивается в начальный период веса. потеря (рисунок А).К 42 дню ограничения калорийности, когда липолиз жировой ткани снижается, экспрессия этих 2 генов возвращается к уровням, наблюдаемым у мышей, никогда не снижавших вес. Чтобы определить, действительно ли липолиз вызывает накопление липидов в банкоматах, мы исследовали содержание липидных капель в макрофагсодержащих стромальных сосудистых клетках (SVC) после 24-часового голодания. Пост резко индуцировал образование липидных капель в ATM и увеличивал количество липидсодержащих пузырьков на 39% в ATM, выделенных натощак, по сравнению с ATM от тучных мышей C57BL / 6J, получавших ad libitum (17.3 ± 3 против 24,1 ± 4,7 липидных везикул на клетку; P <0,001; Рисунок, Б и В). Голодание также увеличивало экспрессию генов, участвующих в захвате, хранении липидов ( Adfp , aP2 , Cd36 ) и экспорте ( Abca1 и ApoE ) в стромальной сосудистой фракции жировой ткани (Рисунок D). .

Пост резко вызывает образование липидных капель в банкоматах.

( A ) Экспрессия в жировой ткани генов, продукты которых, CD36 (Cd36) и рецептор поглотителя A (Msr1), участвуют в захвате липидов макрофагами, измеряли в перигонадной жировой ткани во время потери веса, вызванной ограничением калорийности. n = 5–6 мышей / группа. * P <0,05; *** P <0,001, по сравнению с днем ​​0. ( B ) Стромальные сосудистые клетки (SVC), выделенные из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum (левая панель) или голодали. в течение 24 часов (правая панель) окрашивали на нейтральный липид масляным красным О. Масштабные полосы: 50 мкм. ( C ) Количество липидных капель в макрофагах из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным высоким содержанием жиров, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. n = 5 мышей / группа. *** P <0,001. ( D ) Экспрессия генов (в стромальной сосудистой фракции), кодирующих белки, участвующие в захвате, утилизации и экспорте липидов. n = 5 мышей / группа. * P <0,05. Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Чтобы более точно определить, поглощают ли АТМ липиды в ответ на липолиз как таковой, мы создали систему in vitro для оценки эффектов стимулированного адренергическим действием липолиза адипоцитов на функцию АТМ.Мы совместно культивировали SVC, которые включают макрофаги с жировой тканью от тощих мышей C57BL / 6J в присутствии адренергического стимула (изопротеренол). В отсутствие жировой ткани лечение изопротеренолом не влияло на экспрессию гена SVC или накопление липидов (фигура, A и C, и дополнительная фигура 10A). Однако в присутствии жировой ткани изопротеренол индуцировал экспрессию гена Adfp , который кодирует белок липидных капель, покрывающий липидные капли в банкоматах (19).Кроме того, экспрессия Cd36 была увеличена ( P = 0,09) (Рисунок A). Не было активации программы дифференцировки адипоцитов, то есть не было увеличения экспрессии адипонектина или лептина и снижения экспрессии Pparg (дополнительная фигура 10B). Кроме того, совместное культивирование с жировой тканью и, в большей степени, с добавлением стимуляции изопротеренолом, индуцировало экспрессию гена Ccr2 во фракции SVC, потенциально отражая активацию программы хемотаксических макрофагов (Рисунок B).Гистологически индукция липолиза привела к накоплению липидов в SVC (Рисунок, C и D) и увеличила появление многоядерных нагруженных липидами макрофагов, которые обычно наблюдаются в жировой ткани у людей с ожирением (Рисунок E).

Индукция липолиза жировой ткани активирует захват липидов банкоматами.

( A ) SVC, выделенные из перигонадальной жировой ткани мышей с ожирением, вызванным высоким содержанием жиров, культивировали либо отдельно, либо с кусочками перигонадальной жировой ткани (полученными от тощих животных) с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) или без нее для индукции липолиза. во фракции жировой ткани.Измеряли экспрессию генов Adfp и Cd36 в SVC. n = 5 мышей / группа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ( B ) Экспрессию хемокинового рецептора Ccr2 измеряли в SVC, обработанных, как описано в A . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 5 мышей / группа. ( C ) SVC, обработанные изопротеренолом, культивированным отдельно (левая панель) или с жировой тканью (правая панель), окрашивали на нейтральный липид масляным красным О. Липидсодержащие клетки отмечены стрелками.Масштабные линейки: 50 мкм. ( D ) Процент липидсодержащих клеток среди SVC, обработанных, как описано в A . n = 5 мышей / группа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; ^† P = 0,09. ( E ) Присутствие насыщенных липидами многоядерных гигантских клеток среди SVC, сокультивированных с жировой тканью в присутствии изопротеренола. Масштабная линейка: 15 мкм.

Истощение макрофагов увеличивает липолиз жировой ткани.

Привлечение ATM и поглощение липидов во время периодов липолиза привело нас к гипотезе о том, что ATM играют роль в регулировании локальных концентраций FFA. Чтобы определить, влияют ли ATM на липолиз или высвобождение липидов, мы удалили ATM из жировой ткани, которая содержала высокую концентрацию макрофагов. Эксплантаты эпидидимальной жировой ткани собирали у мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые голодали в течение 24 часов. Эксплантаты обрабатывали инкапсулированным в липосомы клодронатом для истощения ATM, а контрольные эксплантаты от тех же животных обрабатывали инкапсулированным в липосомы PBS.Клодронат представляет собой бифосфонат, который вызывает апоптоз макрофагов при фагоцитозе в липосомах. Как и ожидалось, обработка клодронатом снижала примерно на 80% содержание макрофагов, что измерялось по экспрессии маркера макрофагов Emr1 и экспрессируемого макрофагами рецептора скавенджера Msr1 . Истощение макрофагов увеличивает экспрессию липазы Atgl / Pnpla2 в 2,5 раза и увеличивает экспрессию регулируемых жирными кислотами генов Fabp4 / aP2 , Acadl и Dgat1 .Индукция липазы и генов, необходимых для метаболизма жирных кислот, предполагает, что истощение макрофагов увеличивает липолиз и субстраты FFA. Действительно, по сравнению с обработанными контрольными эксплантами жировой ткани, истощенные макрофагами эксплантаты имели на 27% более высокую скорость липолиза, измеренную по высвобождению глицерина. Чтобы оценить, может ли истощение макрофагов иметь аналогичный эффект на метаболизм FFA in vivo, мы внутрибрюшинно инъецировали худым мышам C57BL / 6J клодронат, инкапсулированный в липосомы, чтобы истощить ATM из депо внутрибрюшной жировой ткани, а затем голодали их в течение 24 часов.Обработка клодронатом по сравнению с контрольной обработкой (инкапсулированный в липосомы PBS) снижала экспрессию генов, специфичных для макрофагов, более чем на 90% (дополнительная фигура 10C). Интраабдоминальное истощение АТМ увеличивало сыворотку натощак (FFA) на 69% по сравнению с контрольными мышами, которым инъецировали липосомы (Рисунок C). Эти данные предоставляют предварительные доказательства того, что функция макрофагов частично ослабляет вызванное липолизом высвобождение FFA.

Эксплантаты жировой ткани были выделены у мышей с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, которые голодали в течение 24 часов.

Впоследствии эксплантаты обрабатывали либо инкапсулированным в липосомы клодронатом, либо инкапсулированным в липосомы PBS. Эксплантаты от одних и тех же мышей обрабатывали в обоих экспериментальных условиях. ( A ) Экспрессия генов, специфичных для макрофагов, и генов, участвующих в метаболизме липидов в эксплантах. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 4 мыши / группа. ( B ) Высвобождение глицерина из эксплантатов перигонадальной жировой ткани, обработанных либо инкапсулированным в липосомы клодронатом, либо инкапсулированным в липосомы PBS.Клодронат, инкапсулированный в липосомы, вводили внутрибрюшинно худым мышам C57BL / 6J. Мышей не кормили в течение 24 часов, начиная с 3 дня после инъекции, и истощение макрофагов в перигонадной жировой ткани было подтверждено в конце периода голодания (день 4). Инкапсулированный в липосомы PBS также вводили в качестве контроля. ( C ) Концентрация FFA в сыворотке у мышей, получавших клодронат или PBS, после 24-часового голодания. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. n = 8 мышей / группа. * P <0.05; ** P <0,01 по сравнению с обработкой PBS.

Обсуждение

Ожирение порождает сложный иммунный ответ, характерным признаком которого является накопление макрофагов в жировой ткани. Факторы, которые регулируют накопление ATM, четко не определены, и действительно, эффекты других метаболических нарушений на накопление и функцию ATM в значительной степени не исследованы. В других условиях рекрутирование предшественников миелоидных макрофагов происходит в ответ на нарушение функции ткани, обычно в ответ на повреждение или чужеродный патоген, но также в ответ на нарушения липидных потоков (40).Например, в стенке артерии локальный избыток холестерина и липопротеинов через двухэтапный процесс рекрутирования и захвата липидов приводит к накоплению нагруженных липидами макрофагов (пенистых клеток) (41). Заполненные липидами макрофаги также являются характерной находкой в ​​жировой ткани людей с ожирением (19, 29). Поэтому мы предположили, что повышенный поток липидов может также регулировать накопление ATM в депо жировой ткани. Здесь мы показали, что накопление макрофагов в жировой ткани является острой реакцией на потерю веса и регулируется липолизом жировой ткани.Эти наблюдения согласуются с предыдущими исследованиями липолиза при ожирении. Общий базальный липолиз хронически повышен в жировой ткани у людей с ожирением по сравнению с жировой тканью у худых людей (25) и в интраабдоминальном по сравнению с подкожной жировой тканью (30, 31). Именно в этих условиях и в депо, в которых липолиз выше, содержание АТМ также повышается (2, 5, 18, 33).

Роль банкоматов в развитии воспаления жировой ткани, вызванного ожирением, и связанных с ним патологических последствий, включая инсулинорезистентность, интенсивно изучается.Наши данные о том, что ATM быстро увеличивают захват липидов в ответ на липолиз адипоцитов, предполагают, что ATM могут выполнять адаптивную функцию, по крайней мере, в течение коротких периодов времени, поглощая избыток FFA (рисунок). Подобный процесс лежит в основе развития атером, когда повышенные концентрации холестерина в стенках сосудов приводят к привлечению предшественников макрофагов в субэндотелиальные пространства. Эффективный захват и клиренс липидов из сосудистой сети является адаптивным, пока макрофагальный клиренс холестерина не нарушен.Однако при развитии атером накопление холестерина опережает способность макрофагов очищать липиды; макрофаги поглощают холестерин, но не мигрируют из своего анатомического положения. Таким образом, нагруженные холестерином макрофаги со временем образуют пенистые клетки, которые остаются в стенке сосуда и становятся центральным патогенным компонентом атеросклеротических поражений (41). Во время похудания как повышение липолиза, так и увеличение АТМ являются временными. Это говорит о том, что ATM поглощают излишки липидов и выводятся из тканей.Однако при ожирении хроническое повышение липолиза и местных концентраций FFA обеспечивает постоянный сигнал для накопления макрофагов. Со временем фенотип АТМ при ожирении, в отличие от того, что наблюдается при потере веса, изменяется так, что популяция CD11c ⁺ , которая описывается как более воспалительная, преобладает и приводит к нарушению местного метаболизма.

Роль АТМ в перемещении липидов во время похудания и голодания.

Активация липолиза во время ранней потери веса и голодания увеличивает локальное высвобождение FFA (а также глицерина и других побочных продуктов липолиза), вызывая рекрутмент ATM.Однажды задействованные, ATMs фагоцитируют избыток липидов и потенциально секретируют антилиполитические факторы, которые вместе снижают локальные концентрации FFA.

Чтобы понять функции банкоматов, было предпринято множество попыток описать производство воспалительных молекул в банкоматах. Однако, как «профессиональные» фагоциты, макрофаги также эффективны в поглощении замечательного набора молекул, от небольших липидов и колоний патогенов до умирающих и мертвых клеток (42). Присутствие липидных капель внутри банкоматов, в том числе крупных однокамерных капель в многоядерных гигантских клетках, позволило некоторым предположить, что ATM в первую очередь функционируют для фагоцитоза некротических адипоцитов (19).Быстрое появление липидных капель в банкоматах во время голодания, даже у худых животных, предполагает, что привлечение макрофагов к жировой ткани, по крайней мере, во время отрицательного энергетического баланса, является частью скоординированного ответа, который может снизить локальные внеклеточные концентрации FFA.

Было обнаружено, что

FFA и другие липиды регулируют состояние активации и иммунную функцию миелоидных клеток и макрофагов. В качестве внеклеточных сигналов жирные кислоты, особенно насыщенные жирные кислоты, активируют классические воспалительные реакции в макрофагах и других иммунных клетках посредством задействования рецепторов распознавания образов, включая TLR (43–45).Наши результаты показывают, что липолиз и повышенные концентрации FFA могут также регулировать накопление макрофагов и делать это без активации провоспалительного или M1-поляризованного состояния. Увеличение количества макрофагов более чем на 40% во время начальной фазы потери веса происходит без увеличения экспрессии воспалительных генов или концентрации циркулирующих адипокинов и поддерживает модель, в которой липиды, помимо их участия в активации ATM, играют важную и особую роль в ATM. набор персонала.

Накопление банкоматов в жировой ткани — это только часть иммунного ответа на ожирение. Т-клетки также рекрутируются в жировую ткань во время развития ожирения (1, 7–9, 11). Если Т-клетки играют роль в жировой ткани, сравнимую с той, что играет в атеромах, субпопуляции Т-клеток могут регулировать набор и функцию ATM и других миелоидных клеток. Сложность иммунного ответа жировой ткани на метаболические нарушения дополнительно увеличивается из-за неоднородности популяций АТМ.Два крупнейших класса ATM можно выделить на основе экспрессии антигенов F4 / 80, CD11b и CD11c; одна популяция экспрессирует все 3 антигена (клетки FBC), а вторая — только F4 / 80 и CD11b (клетки FB) (46, 47). Представленные здесь данные свидетельствуют о том, что в основном клетки FB накапливаются во время отрицательного энергетического баланса. Это контрастирует с развитием ожирения, когда преобладают клетки FBC, и может объяснить, почему накопление ATM во время ранней потери веса не сопровождается увеличением воспаления жировой ткани и резистентности к инсулину.Онтогенез, функции и, в частности, метаболизм свободных жирных кислот и других липидов отдельных субпопуляционных АТМ еще предстоит определить и, вероятно, предоставят механистическое понимание различий в иммунном ответе на ожирение и потерю веса.

Наши результаты подтверждают модель, в которой липолиз жировой ткани способствует привлечению ATM и захвату липидов (рисунок). Эти данные предполагают, что ATM могут играть роль в сдерживании внеклеточного увеличения концентраций FFA в периоды высокого липолиза и, таким образом, могут защищать локальную функцию адипоцитов.В худом состоянии адипоциты накапливают мало липидов, базальный липолиз ограничен, а банкоматов мало. Когда липолиз активируется и концентрации FFA резко увеличиваются, макрофаги быстро накапливаются в жировой ткани без значительного начального увеличения воспаления. После набора, ATMs фагоцитируют избыток липидов, возможно, снижая стресс адипоцитов. Во время потери веса увеличение потребности в липолизе увеличивает локальную концентрацию FFA и, таким образом, рекрутмент ATM. Однако постепенно, по мере уменьшения запасов триглицеридов и снижения базального липолиза, содержание АТМ снижается.При ожирении избыточное накопление липидов большими адипоцитами увеличивает базальный липолиз и, таким образом, чистое высвобождение FFA. Макрофаги рекрутируются в жировую ткань, но в отличие от потери веса, при которой липолиз в конечном итоге уменьшается, хроническая стимуляция банкоматов приводит к локальному воспалению и изменению метаболической функции.

Методы

Мыши и протокол потери веса.

Самцов мышей C57BL / 6J были получены из лаборатории Джексона в возрасте 9 недель и размещены индивидуально в вентилируемых клетках из оргстекла в пределах барьера, свободного от патогенов, который поддерживает цикл 12 часов света / 12 часов темноты.Мышей кормили диетой с высоким содержанием жиров (D12492; Research Diets Inc.) (подробности о составе рациона см. В дополнительной таблице 1). Пищевые гранулы помещали на кормушки (Wenzel) для повышения точности измерений потребления пищи. Потребление пищи измеряли ежедневно для каждой мыши индивидуально в течение 1 месяца до начала ограничения калорийности. Ограничение калорийности начинали, когда мышей весили 40–41 г. Мы изменили распределение мышей по разным группам с ограничением калорий, чтобы возраст каждой группы существенно не отличался при умерщвлении (дополнительный рисунок 2).Во время ограничения калорийности каждая мышь получала 70% от своего потребления ad libitum (среднее потребление пищи 70% / средний вес). Контрольная постная группа получала стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc.). Для эксперимента по ограничению калорийности высокоуглеводной диеты мышей переводили на D12450B (Research Diets Inc.) (подробности о составе рациона см. В дополнительной таблице 1). Потребление пищи корректировали ежедневно в зависимости от веса мыши. Мышей кормили в начале цикла темноты и света (они получали две трети пищи в темноте и одну треть во время светового цикла.Измерения состава тела проводились с помощью анализатора ЯМР miniSpec TD (Bruker). Образцы крови для измерения исходного уровня инсулина были получены при поднижнечелюстном кровотечении. Уровень глюкозы в крови измеряли с помощью глюкометра FLASH FreeStyle (Abbott). Мышей умерщвляли асфиксией CO ₂ и смещением шейного отдела после 4-часового голодания в течение пятого и шестого часов светового цикла. Образцы сыворотки для окончательных измерений инсулина, свободных жирных кислот и цитокинов собирали путем сердечной пункции.Подкожную брюшную, эпидидимальную, периренальную и брыжеечную жировые ткани иссекали, и правые депо жировой ткани и все брыжеечные депо взвешивали для каждого животного. Образцы тканей замораживали в жидком азоте и хранили при –80 ° C перед экстракцией РНК и иммуногистохимическим анализом. Эксперимент проводился в 2 отдельных случаях ( n = 40 на эксперимент). Все эксперименты на животных были одобрены IACUC Колумбийского университета.

Голодные эксперименты.

Постных мышей C57BL / 6J (возраст от 8 до 9 недель), получавших стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc.), не кормили в течение 24 часов, начиная со второго часа светового цикла. В качестве контроля использовали мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum по весу и возрасту. Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

Для экспериментов натощак на мышах с ожирением, вызванным высокожировой диетой, использовали мышей в возрасте от 24 до 28 недель. Мышей помещали на диету с высоким содержанием жиров (D12492 / Research Diets Inc.) начиная с 6-недельного возраста. Они прошли 24-часовое голодание, начиная со второго часа светового цикла.

Пять 8-недельных мышей Ccr2 ^{— / —} и пять 8-недельных мышей Ccr2 ^{+ / +} (однопометники), получавших стандартную гранулированную диету (PicoLab Rodent Diet 20; Purina Mills Inc. ) голодали в течение 24 часов, начиная со второго часа светового цикла. Пять одинаковых по весу и возрасту мышей Ccr2 ^{— / —} и 5 Ccr2 ^{+ / +} мышей (однопометников) использовали в качестве контроля.Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

CL316,243 для лечения мышей.

Десять 8-недельных мышей C57BL / 6J, получавших стандартную гранулированную диету (см. Выше), вводили внутрибрюшинно 1 мг / кг CL316,243 или физиологического раствора дважды (4 часа между каждой инъекцией). Мышей умерщвляли через 14 часов после второй инъекции. Перигонадную жировую ткань иссекали и образцы хранили, как описано выше.

BrdU для мышей.

Десять 8-недельных мышей C57BL / 6J, получавших стандартную гранулированную диету (см. Выше), вводили внутрибрюшинно 0,133 мг / г BrdU (Sigma-Aldrich) или носитель дважды (3 часа между каждой инъекцией). Через 1,5 часа после первой инъекции мы убрали еду из опытной группы. Контрольную группу кормили без ограничений. Обе группы были принесены в жертву 24 часа спустя. Перигонадную жировую ткань иссекали, и образцы хранили, как описано выше.

Atgl

^{— / —} и Atgl ^{+ / +} мышей.

Образцы перигонадальной жировой ткани от мышей Atgl ^{+ / +} и Atgl ^{— / —} были собраны у худых мышей в возрасте 8–9 недель, которых кормили ad libitum или голодали в течение 16 часов.

Метаболические анализы.

Уровни инсулина в сыворотке определяли с помощью сверхчувствительного инсулинового ELISA (Mercodia Inc.). PAI-1 и резистин в сыворотке измеряли с использованием панели мышиного адипокина LINCOplex (Millipore). Уровень лептина в сыворотке измеряли с использованием количественного анализа лептина мыши ELISA (системы R&D).FFA измеряли с использованием серии HR NEFA (Wako Diagnostics). Образцы крови для выделения сыворотки собирали после 4-часового голодания в течение пятого и шестого часов светового цикла. Образцы сыворотки, собранные, представленные на рисунке A, также были проанализированы на несколько гормонов и цитокинов и поэтому были помещены на влажный лед перед дальнейшей обработкой. Образцы сыворотки, представленные на рисунке A и рисунке A, использовались только для анализа FFA и были немедленно заморожены в жидком азоте перед анализом (для минимизации липолиза триглицеридов).

Иммуногистохимия.

Образцы жировой ткани фиксировали в течение 48 часов при комнатной температуре в цинк-формалиновом фиксаторе (Anatech Ltd.), инкубировали в 70% этаноле в течение 24 часов и затем заливали парафином. Срезы размером 5 мкм с интервалами 50 мкм помещали на заряженные предметные стекла, депарафинизировали в ксилоле и окрашивали на экспрессию F4 / 80 крысиным моноклональным антителом против F4 / 80 мыши (Abd Serotec). Срезы инкубировали с первичным антителом в течение 80 минут при комнатной температуре (разведение 1: 100).Крысиный IgG2a (Invitrogen) использовали в качестве изотипического контроля (разведение 1:50). Затем использовали биотинилированное вторичное антитело против крыс в разведении 1: 200, затем комплекс Avidin DH: биотинилированная пероксидаза H хрена (Vector Laboratories) и развитие в хромогенном субстрате 3,3′-диаминобензидин (Vector Laboratories). Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Для каждого отдельного депо жировой ткани было проанализировано 5–10 различных мощных полей из каждого из 3 различных срезов. Общее количество ядер и количество ядер клеток, экспрессирующих F4 / 80, подсчитывали для каждого поля.Долю клеток, экспрессирующих F4 / 80, для каждого образца рассчитывали как сумму количества ядер клеток, экспрессирующих F4 / 80, деленное на общее количество ядер в срезах образца. Площадь поперечного сечения определяли для каждого адипоцита в каждом поле с использованием программного обеспечения для анализа изображений Image-Pro Plus (Media Cybernetics Inc.). Для каждой мыши подсчитывали 800–1000 адипоцитов. Число адипоцитов рассчитывали исходя из веса жировой подушечки и объема адипоцитов (48).

Для обнаружения BrdU-положительных клеток готовили срезы, как описано выше, и проводили иммуногистохимию с использованием моноклонального биотинилированного анти-BrdU (набор для окрашивания BrdU; Invitrogen).Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Для каждого отдельного депо жировой ткани было проанализировано 10 различных мощных полей из каждого из 3 различных срезов. Общее количество ядер и количество ядер BrdU-положительных клеток подсчитывали для каждого поля. Долю BrdU-положительных клеток для каждого образца рассчитывали как сумму количества ядер BrdU-положительных клеток, деленную на общее количество ядер в срезах образца.

Для обнаружения CD11c-положительных клеток использовали замороженные срезы (10 мкм).Срезы окрашивали для выявления экспрессии CD11c с помощью хомячкового антитела против CD11c мыши (Abd Serotec). Срезы инкубировали с первичным антителом в течение 60 минут при комнатной температуре (разведение 1: 100). IgG хомяка использовали в качестве изотипического контроля (разведение 1: 100) (Abd Serotec). Затем использовали биотинилированное вторичное антитело против хомяка в разведении 1: 200 (30 минут), затем использовали комплекс Avidin DH: биотинилированная пероксидаза H хрена (Vector Laboratories) и проявили в хромогенном субстрате 3,3′-диаминобензидин (Vector Laboratories). .Предметные стекла контрастировали гематоксилином. Общее количество ядер и количество CD11c-положительных CLS подсчитывали для каждого поля. Долю CD11c-положительных CLS для каждого образца рассчитывали как сумму количества положительных CLS, деленную на общее количество ядер в срезах образца.

Для двойного иммунофлуоресцентного окрашивания клеток, экспрессирующих F4 / 80 и CD11c, использовали замороженные срезы. Срезы инкубировали с первичными антителами в течение ночи при 4 ° C (разведение 1: 100).Затем добавляли ослиный IgG против Cy3 крысы (Jackson ImmunoResearch) и козий IgG против хомяка Alexa Fluor 488 (Invitrogen). Срезы инкубировали 45 минут при комнатной температуре (разведение 1: 300). Флуоресцентная микроскопия выполнялась с использованием Nikon Eclipse 80i, оснащенного камерой Retiga Exi и системой флуоресцентного освещения X-Cite 120.

Количественная RT-PCR.

РНК экстрагировали из замороженной жировой ткани с использованием кислотно-фенольного реагента (TRIzol; Invitrogen). РНК выделяли из SVC с использованием QIAGEN RNeasy Minikit (QIAGEN) и использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК с использованием обратной транскриптазы Superscript III (Invitrogen) и случайных гексамерных праймеров.Количественные анализы RT-PCR проводили с использованием системных инструментов DNA Engine Opticon 2 (Bio-Rad) и PCR SYBR Green I QuantiTect Master Mix (QIAGEN). Экспрессия мРНК всех указанных генов нормализована к экспрессии гена циклофилина B ( Ppib ). Каждую реакцию проводили в двух экземплярах, и данные анализировали методом 2-DDCT (49). Все использованные праймеры перечислены в дополнительной таблице 3.

Липолиз in vitro изолированной перигонадальной жировой ткани (эксплантаты).

Перигонадные жировые подушечки были удалены хирургическим путем у мышей C57BL / 6J, получавших с высоким содержанием жира ( n = 5 / группа), которые либо кормились ad libitum, либо подвергались ограничению калорийности. Впоследствии их несколько раз промывали PBS. Кусочки ткани (общий вес ~ 100 мг) инкубировали в среде DMEM (Invitrogen), содержащей 2% БСА, не содержащий жирных кислот (Sigma-Aldrich), при 37 ° C. Аликвоты собирали через 120 минут и исследовали на содержание FFA и глицерина. FFA и глицерин измеряли с использованием серии HR NEFA (Wako Diagnostics) и набора для определения свободного глицерина (Sigma-Aldrich) соответственно.Мы измерили количество адипоцитов в параллельных образцах от мышей, получавших ad libitum с одинаковым весом и жиром, и мышей с ограничением калорийности.

Опыты по совместительству.

Чтобы изолировать SVC, перигонадальную жировую ткань выделяли у самцов мышей C57BL / 6J с ожирением, вызванных диетой с высоким содержанием жиров, сразу после удушья CO ₂ . Ткани обрабатывали стерильными методами и измельчали ​​на мелкие (<10 мг) кусочки. Для выделения SVC измельченные образцы помещали в DMEM (Invitrogen) с добавлением 10 мг / мл BSA (Sigma-Aldrich).К суспензии ткани добавляли коктейль с обедненной ЛПС коллагеназой (Liberase 3; Roche Applied Science) в концентрации 0,03 мг / мл, и образцы инкубировали при 37 ° C на орбитальном шейкере (3 г ) в течение 45 минут. минут. После завершения разложения образцы пропускали через стерильную нейлоновую сетку 250 мкм (Sefar America Inc.). Суспензию центрифугировали при 500, г, в течение 5 минут. Осажденные клетки собирали в виде SVC. SVC ресуспендировали в буфере для лизиса эритроцитов (BD Biosciences) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 минуты.SVC высевали в концентрации 650 000 клеток / лунку на вкладыши для клеточных культур с размером пор 1 мкм (BD). Каждую вставку помещали в лунку 12-луночного планшета для культуры ткани (BD), содержащего 100 мг тонко измельченной жировой ткани. Чтобы выделить небольшие неповрежденные кусочки жировой ткани для культивирования, перигонадную жировую ткань удаляли у тучных мышей C57BL / 6J, получавших пищу с высоким содержанием жира, и измельчали ​​до кусочков размером примерно 10 мг. SVC совместно культивировали с кусочками жировой ткани в течение 24 часов в среде DMEM, содержащей 10% FBS, 1% пенициллин и 2% BSA, не содержащий жирных кислот.Изопротеренол (Sigma-Aldrich) добавляли в выбранные лунки в концентрации 10 мкмоль / л. Фракцию стромальных сосудов собирали для экспрессии гена или окрашивания масляным красным О через 24 часа.

Окрашивание масляным красным О.

SVC сушили на воздухе и фиксировали цинк-формалиновым фиксатором (см. Выше) в течение 10 минут и окрашивали масляным красным О, как описано ранее (50).

Анализ миграции макрофагов.

BMDM мыши были дифференцированы in vitro из клеток-предшественников костного мозга.Вкратце, клетки костного мозга вымывали из бедренных и большеберцовых костей 9-недельных мышей C57BL / 6J, промывали в DMEM (Invitrogen) и выращивали в течение 7 дней в чашках Петри, содержащих DMEM с 10% FBS, 20% кондиционированных клеток L929. среды, 5% лошадиной сыворотки, 1% глутамина и 1% пирувата натрия. На седьмой день среды заменяли на DMEM, содержащую 10% FBS, 10% среды, кондиционированные клетками L929, 5% лошадиной сыворотки, 1% глутамина и 1% пирувата натрия; макрофаги выращивали еще 3 дня. Дифференциация подтверждена анализом FACS.Миграцию BMDM оценивали с использованием 96-луночного анализа миграции клеток с 5 мкм хемотаксисом QCM (Millipore) в соответствии с инструкциями производителя. В нижнюю камеру добавляли среду, кондиционированную эксплантатом, простую среду или среду, содержащую рекомбинантный MCP-1 (50 нг / мл) (PeproTech). Для получения среды, кондиционированной эксплантами, эксплантаты выделяли от тощих 10-недельных мышей C57BL / 6J, которых кормили ad libitum или голодали в течение 24 часов. Эксплантаты от голодных животных инкубировали в базовых условиях, как описано выше, тогда как эксплантаты от мышей, получавших ad libitum, инкубировали с обработкой изопротеренолом (10 мкМ) (Sigma-Aldrich) или без нее.Содержание FFA в эксплантатах оценивали с помощью серии HR NEFA (Wako Diagnostics). Планшеты с миграционной камерой инкубировали в течение 15 часов при 37 ° C в инкубаторе CO ₂ . В конце инкубации клетки детектировали зеленым флуоресцентным красителем (краситель CyQUANT), включенным в анализ. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью Infinite 500 (Tecan). Количество клеток определяли на основании показаний флуоресценции и стандартной кривой.

Препарат клодроната, инкапсулированный в липосомы.

24 мг холестерина и 258 мг фосфатидилхолина (Sigma-Aldrich) растворяли в хлороформе в круглодонной колбе. Хлороформ упаривали при 37 ° C в роторном испарителе в вакууме до образования тонкой липидной пленки. Три грамма клодроната (динатриевая соль дихлорметилендифосфоновой кислоты) (Sigma-Aldrich) растворяли в 15 мл PBS. К липидной пленке добавляли раствор клодронат-PBS или контрольный раствор PBS и встряхивали при 4 г в течение 30 минут.Раствор обрабатывали ультразвуком в течение 10 минут при комнатной температуре в ультразвуковом устройстве с водяной баней (50 Вт). Липосомы центрифугировали при 49 400 g в течение 1 часа и ресуспендировали в 12 мл PBS.

Истощение макрофагов за счет инкапсулированного в липосомы клодроната.

Клодронат, инкапсулированный в липосомы, вводили внутрибрюшинно мышам C57BL / 6J. Каждая мышь получала липосомы, содержащие 115 мг / кг клодроната или эквивалентный объем липосом, содержащих PBS.Мышей не кормили в течение 24 часов, начиная с 3 дня после инъекции, и истощение макрофагов в перигонадной жировой ткани было подтверждено в конце периода голодания (день 4). Для экспериментов in vitro перигонадные жировые подушечки удаляли хирургическим путем у мышей C57BL / 6J, получавших пищу с высоким содержанием жира ( n = 4 / группа), которые не голодали в течение 24 часов. Впоследствии их несколько раз промывали PBS. Кусочки ткани (общий вес ~ 75 мг) инкубировали в среде DMEM (Invitrogen), содержащей 1% антибиотиков, без добавления сыворотки.Через 6 часов в свежую среду добавляли 20% липосом, содержащих либо клодронат, либо PBS, до конечного объема 1 мл. Эксплантаты выдерживали 48 часов при 37 ° C в инкубаторе CO ₂ . Затем среды, содержащие липосомы, перемещали и добавляли DMEM, содержащую 2% БСА без жирных кислот (Sigma-Aldrich). Аликвоты собирали через 120 минут и исследовали на содержание глицерина. Глицерин измеряли с помощью набора для определения свободного глицерина (Sigma-Aldrich). Эксплантаты также использовали для выделения РНК.

Статистика.

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Все значения P были рассчитаны с использованием двухстороннего распределения, двухвыборочного теста с неравной дисперсией t Стьюдента. Все расчеты были выполнены с использованием Microsoft Excel и Statistica (Statsoft Inc.).

Руководство по окислению жира: использование телесного жира в качестве топлива

Сжигание жира — это большой бизнес. Достаточно взглянуть на валовую выручку индустрии похудения, которая, так уж получилось, составляет 66 миллиардов долларов в год <1,2>, чтобы доказать, что есть деньги, которые можно заработать, помогая людям избавляться от нежелательного жира.

На протяжении десятилетий были выпущены всевозможные пилюли, зелья и порошки с единственной целью — помочь человеку, который изо всех сил пытается поддерживать идеальный состав тела. И какое-то время люди действительно добиваются определенного успеха в своих индивидуальных начинаниях по снижению веса — короче говоря.

Видите ли, сколько денег индустрия похудания генерирует каждый год, они не приносят долгосрочных результатов для потребителя. Примерно 70% населения Соединенных Штатов имеет избыточный вес или страдает ожирением, а процент людей в возрасте от 12 до 17 лет, которые имеют избыточный вес, удвоился с 1980 года.

Кроме того, около 95% людей с избыточным весом или ожирением, которые все же придерживаются диеты, в конечном итоге восстанавливают потерянный вес (а иногда и больше) в течение одного года после попытки соблюдать диету.

Достаточно сказать, что нынешняя система похудения не очень эффективна, независимо от того, насколько она прибыльна.

И прежде чем обвинять отрасль, вы должны понять, что виноваты обе стороны. Потребитель не может придерживаться своей диеты, а промышленность продвигает диеты, которые не являются устойчивыми, и добавки, которые в лучшем случае являются квазиэффективными.

Итак, поскольку нынешняя система работает не очень хорошо, что мы можем сделать, чтобы улучшить потерю жира для потребителей и помочь им избавиться от жира раз и навсегда?

Обучайте их.

Как и в большинстве случаев в жизни, чем лучше вы разбираетесь в предмете, тем больше у вас шансов применить его принципы и добиться успеха.

Итак, имея это в виду, давайте обсудим все тонкости того, как ваше тело сжигает жир.

Сжигание жира против окисления жира

Во-первых, давайте разберемся с терминологией.

Говоря о сжигании жира, мы говорим с физиологической точки зрения об окислении жира.

Что это значит?

Как вы, вероятно, знаете, жировые клетки (жировая ткань) являются основным местом хранения жира в организме, и они находятся в постоянном состоянии обмена, что означает, что жир постоянно входит или выходит из клетки на основе нескольких факторов, включая гормоны. , питание и обмен веществ. <3> Чистый эффект этих факторов определяет количество жирных кислот, циркулирующих в вашем кровотоке, а также количество накопленного жира.

Жир хранится в жировой ткани в виде триглицеридов. Эти триглицериды попадают в кровоток под действием фермента гормоночувствительной липазы (HSL) <3,4>, где они затем могут сжигаться («окисляться») для получения энергии.

Этот процесс высвобождения накопленных жирных кислот в кровоток для производства энергии известен как липолиз .

Что происходит при окислении жира?

Окисление жира можно разделить на три фазы:

• Липолиз
• Мобилизация
• Окисление

Липолиз: высвобождение накопленного жира

Триглицериды состоят из глицериновой «основы» и трех жирных кислот.Чтобы ваш организм мог сжигать жирные кислоты, их необходимо сначала отделить от молекулы глицерина. Для этого фермент под названием липаза отщепляет жирные кислоты от глицерина путем гидролиза. <3,4>

Мобилизация: транспортировка жира для окисления

Вторая фаза сжигания жира происходит в форме мобилизации жирных кислот.

После отделения и высвобождения из жировой клетки жирные кислоты попадают в кровоток, где они циркулируют в связке с белком, называемым сывороточным альбумином.

Сывороточный альбумин действует как своего рода «такси», которое помогает доставить жирные кислоты к клетке-мишени, требующей энергии. и войдите в мышцы, чтобы их «обжечь».

Причина, по которой жирные кислоты требуют перемещающего действия альбумина, заключается в том, что кровь состоит в основном из воды. Если вы когда-либо сами готовили заправку для салата, вы убедились, что вода и масло плохо смешиваются друг с другом. Это связано с тем, что жир не растворяется в воде, то есть не растворяется в воде.<5>

Сам по себе альбумин служит переносчиком белка, который таксирует жирные кислоты через кровоток в мышечные клетки, когда они необходимы. Каждый белок альбумина может содержать несколько жирных кислот. <5>

По прибытии в клетку-мишень мы входим в заключительную фазу процесса сжигания жира …

Окисление: сжигание жира в качестве топлива

Когда жирные кислоты попадают в клетку, они накапливаются в цитоплазме ячейка, представляющая собой густой раствор, заполняющий внутренние области ячейки.Но мы не хотим, чтобы жирные кислоты оставались в цитоплазме.

Для того, чтобы они были преобразованы в АТФ (т. Е. Сжигались для получения энергии), они должны попасть в митохондрии клетки, которые можно рассматривать как мини-ядерный реактор каждой отдельной клетки, который генерирует энергию, необходимую для питания клетки.

Фактический процесс превращения жирных кислот в АТФ называется бета-окислением. Это многоступенчатый процесс, который сам по себе требует длительного обсуждения и глубокого погружения в биохимию, что может усыпить большинство из вас.

Для целей этой статьи просто знайте, что бета-окисление — это процесс, с помощью которого ваше тело получает энергию из жирных кислот.

Жирные кислоты перемещаются из цитоплазмы в митохондрии под действием вещества под названием карнитин, , которое многие из вас, вероятно, видели в своих любимых жиросжигающих добавках, таких как Steel Sweat.

После преобразования в АТФ, эта энергия может использоваться клеткой для обеспечения ее энергии для выполнения любого вида деятельности, которую вы можете выполнять (поднятие тяжестей, кардио, ходьба, лежа на диване и т. Д.).)

Но, , что будет, если нет немедленной необходимости?

В некоторых случаях (например, голодание, голодание и т. Д.) Большое количество жирных кислот расщепляется и впоследствии наводняет митохондрии. Поскольку мышцы не требуют большого количества энергии, жирные кислоты превращаются в кетоны, которые затем могут использоваться мозгом и мышцами в качестве источника энергии.

Эти кетоновые тела богаты энергией и являются предпочтительным источником энергии для людей, придерживающихся низкоуглеводной, кетогенной и нулевой углеводов.

Как увеличить окисление жира

Поскольку большинство людей, посещающих фитнес-центр, хотят сбросить жир, имеет смысл обсудить, что мы можем сделать, чтобы улучшить окисление жира и ускорить потерю жира.

Уменьшить калорийность

Один из этих способов — снизить расход калорий, то есть создать дефицит калорий. Когда вы уменьшаете количество потребляемых калорий, ваше тело должно восполнять недостаток энергии (пищи), которую вы потребляете, чтобы удовлетворить свои потребности в энергии за счет извлечения из ваших жировых запасов.

Вот почему сокращение калорий — это одна из главных вещей, которые вам нужно сделать для похудания. Снижение веса в конечном итоге сводится к энергетическому балансу в организме, то есть калориям на входе и на выходе. Чтобы создать отрицательный энергетический баланс, вы можете уменьшить количество потребляемых калорий и увеличить количество потребляемых калорий, что достигается с помощью упражнений.

Регулируйте уровень инсулина

Ранее в этой статье мы обсуждали важность гормоночувствительной липазы в высвобождении накопленных жирных кислот из жировой ткани.Существует еще один гормон, с которым вы, вероятно, хорошо знакомы, который противостоит действию гормоночувствительной липазы, называемый инсулином .

Инсулин — это гормон в вашем организме, который отвечает за доставку питательных веществ в ваши клетки, включая мышечные и жировые клетки, которые затем могут использоваться для производства энергии.

Основным макроэлементом, вызывающим повышение уровня инсулина, являются углеводы, и поскольку инсулин эффективно отключает процесс сжигания жира, поддержание низкого уровня инсулина имеет важное значение для максимального сжигания жира.

Вот почему так много кетогенных низкоуглеводных диет ограничивают потребление углеводов. Они пытаются ограничить количество выделяемого инсулина, чтобы вы сжигали все больше и больше жира, а не глюкозы.

Но то, что мы пытаемся сжигать жир, не означает, что мы должны избегать любых углеводов.

Вы по-прежнему можете есть углеводы и сжигать жир, но для этого с вашей стороны требуется правильный выбор питательных веществ.

Простые сахара вызывают большие выбросы инсулина в организме, чем сложные углеводы или белок.Если вы пытаетесь добиться максимального сжигания жира, вам следует выбирать такие продукты, как зеленые овощи, ягоды, авокадо, а также белки, которые снижают выбросы инсулина и способствуют сжиганию жира.

Но давайте предположим, что несколько раз в неделю вы все равно захотите полакомиться сладостями и при этом сбросить жир.

Вы можете что-нибудь сделать?

ДА!

И это происходит в форме …

Exercise

Как мы уже говорили выше, увеличение количества калорий — один из способов изменить энергетический баланс в пользу сжигания жира.Это, конечно же, достигается с помощью упражнений, и мы можем максимизировать сжигание жира, выполняя правильные типы упражнений.

Наука довольно четко показала, что во время упражнений ваши мышцы могут использовать как пищевые углеводы, так и жир, выступающие в качестве субстратов, используемых для получения энергии. <7,8,9> Однако есть несколько факторов, которые влияют на то, какие макроэлементы ваше тело использует для получения энергии. Факторы, влияющие на использование субстрата, включают <10>:

• Диета

  Если вы придерживаетесь низкоуглеводной диеты и / или идете на тренировку натощак, вы будете сжигать жир в качестве топлива.

• Содержание гликогена в мышцах

  В вашем теле есть конечное количество гликогена, хранящегося в мышцах. Как только эти запасы истощатся, организм начнет извлекать энергию из ваших жировых запасов.

• Интенсивность упражнений

  В упражнениях с низкой и умеренной интенсивностью в основном используется жир в качестве источника энергии. Чем выше вы интенсивно тренируетесь, тем больше вы переходите на сжигание гликогена и глюкозы.

  Research отмечает, что максимальная скорость окисления жира достигается при тренировках с интенсивностью 59-64% от максимального потребления кислорода тренированными людьми и 47-52% максимального потребления кислорода в общей популяции.<6>

• Продолжительность обучения

  Чем дольше вы тренируетесь, тем больше вы истощаете гликоген, и как только эти запасы истощаются, вы переключаетесь на сжигание жира в качестве топлива.

• Статус обучения

  Чем больше вы «в хорошей форме», тем тяжелее вы можете тренироваться, прежде чем перейти от сжигания жира к сжиганию глюкозы. Кроме того, чем больше вы в хорошей физической форме, тем ниже будет уровень инсулина в состоянии покоя, что позволит вам сжигать больше жира за пределами окон приема пищи.

Благодаря этим факторам вы можете начать понимать, почему большинство кардио-сессий натощак выполняются с относительно низкой интенсивностью — это максимизирует сжигание жира в организме.

Означает ли это, что вы должны выполнять кардио-упражнения только в устойчивом состоянии, когда пытаетесь сбросить жир?

Нет, совсем нет.

Существует нечто, известное как EPOC (избыточное потребление кислорода после тренировки), которое, по научным данным, объясняет эффект «дожигания», создаваемый высокоинтенсивными упражнениями, когда ваше тело продолжает сжигать калории даже после завершения тренировки.

Стабильное кардио, хотя оно сжигает больше жира в течение фактического времени, когда вы тренируетесь, по сравнению с интервальным кардио, практически не влияет на EPOC, а это означает, что как только вы перестанете выполнять стабильное кардио, калории будут сожжены. останавливаться.

Вот почему вы все еще можете терять жир даже без каких-либо постоянных кардиотренировок. Дефицит кислорода, создаваемый высокоинтенсивными формами тренировок, такими как поднятие тяжестей или интервальные тренировки, приводит к большему общему сжиганию калорий, поскольку ваше тело работает над восстановлением гомеостаза.

Ваше тело использует кислород для:

• Регенерации АТФ, который был сожжен во время тренировки
• Ресинтез мышечного гликогена, истощенного во время тренировки
• Восстановить уровень кислорода в крови
• Восстановить мышечную ткань, поврежденную во время тренировки
• Восстановление внутренней температуры до уровня покоя (гомеостаза)

Каждое из этих действий требует определенного количества энергии для выполнения, и если у вас дефицит калорий, эта энергия поступает из ваших жировых запасов.

Вот почему интервальные тренировки высокой интенсивности могут помочь похудеть, даже если вы технически не используете жир в качестве топлива во время тренировки.

Смысл этого в том, чтобы сказать, что как устойчивые, так и высокоинтенсивные интервальные тренировки можно использовать для сжигания жира. Механизмы их работы разные, но конечный результат один и тот же. <11>

Takeaway

Сжигание жира — это отрасль стоимостью в миллиард долларов, но очень немногие люди на самом деле понимают теорию и науку о том, что нужно для сжигания жира, и еще меньше людей знают, как применить ее в повседневной жизни.

Надеюсь, это руководство пролило свет на управляемые способы сжигания большего количества жира в повседневной жизни, чтобы вы могли достичь тела, о котором всегда мечтали.

И, если вам нужна помощь в сжигании лишних калорий и переводе вашего тела в сторону более сильной жиросжигающей среды, посмотрите Steel Sweat.

Steel Sweat — идеальный предтренировочный комплекс для тренировок натощак. Он не только включает в себя такие ингредиенты, как кофеин, которые помогают высвобождать жирные кислоты для сжигания для получения энергии, но также включает несколько соединений, способствующих сжиганию жира, таких как L-карнитин, L-тартрат и парадоксин, которые забирают эти освобожденные жирные кислоты и сжигают их для энергия.

Steel Sweat поможет вам сжечь жир, как никогда раньше, и добиться желаемых результатов и многое другое!

Опубликуйте свои улучшения в похудении в Instagram и отметьте @steelfitusa хэштегом #IAMSTEELFIT, чтобы получить шанс быть представленным!

Ссылки

1. https://www.marketresearch.com/Marketdata-Enterprises-Inc-v416/Weight-Loss-Diet-Control-10825677/
2. https://www.prnewswire.com/news-releases/us-weight-loss-market-worth-66-billion-300573968.HTML
3. Арнер, П. (2005). Липолиз человеческих жировых клеток: биохимия, регуляция и клиническая роль. Лучшие практики и исследования. Клиническая эндокринология и метаболизм, 19 (4), 471–482. https://doi.org/10.1016/j.beem.2005.07.004
4. Ласс А., Циммерманн Р., Оберер М., Цехнер Р. Липолиз — высоко регулируемый мультиферментный комплекс опосредует катаболизм клеточных жировых отложений. Прогресс в исследованиях липидов. 2011; 50 (1-4): 14-27. DOI: 10.1016 / j.plipres.2010.10.004.
5. Холлоуэй, Г.П., Луйкен, Дж. Дж. Ф. П., Глатц, Дж. Ф. К., Сприет, Л. Л., и Бонен, А. (2008). Вклад FAT / CD36 в регуляцию окисления жирных кислот в скелетных мышцах: обзор. Acta Physiologica, 192, 293-309.
6. Achten, J., & Jeukendrup, A. E. (2004). Оптимизация окисления жиров с помощью упражнений и диеты. Питание (Бербанк, округ Лос-Анджелес, Калифорния), 20 (7–8), 716–727. https://doi.org/10.1016/j.nut.2004.04.005
7. FRAWLEY K, GREENWALD G, ROGERS RR, PETRELLA JK, MARSHALL MR. Влияние предшествующего голодания на окисление жира во время упражнений с отягощениями.Международный журнал науки о физических упражнениях. 2018; 11 (2): 827-833.
8. Achten J, Gleeson M, Jeukendrup AE. Определение интенсивности упражнений, вызывающих максимальное окисление жиров. Медико-спортивные упражнения. 2002. 34 (1): 92–97.
9. Achten J, Jeukendrup A. Максимальное окисление жиров во время упражнений у тренированных мужчин. Int J Sports Med. 2003. 24 (08): 603–608.
10. Venables, M. C., Achten, J., & Jeukendrup, A. E. (2005). Детерминанты окисления жиров во время упражнений у здоровых мужчин и женщин: перекрестное исследование.Журнал прикладной физиологии, 98 (1), 160–167. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.00662.2003
11. Чжан Х., Тонг Т.К., Цю В. и др. Сопоставимые эффекты высокоинтенсивных интервальных тренировок и длительных непрерывных тренировок на снижение абдоминального висцерального жира у молодых женщин с ожирением. Журнал исследований диабета. 2017; 2017: 5071740. DOI: 10.1155 / 2017/5071740.
12. Foureaux, G., Pinto, K. M. de C., & Dmaso, A. (2006). Влияние избыточного потребления кислорода после тренировки и скорости метаболизма в состоянии покоя на затраты энергии. Revista Brasileira de Medicina Do Esporte , 12 (6), 393–398. https://doi.org/10.1590/S1517-86
6000600018

Физиологический процесс похудания | Бюллетень Национального исследовательского центра

Acheson KJ, Zahorska MB, Pittet PY, Jéquier SD (2012) Метаболические эффекты кофеина у людей: окисление липидов или бесполезная цикличность? Am J Clin Nutr 33 (5): 989–997

Статья Google Scholar

Аль-Гоблан А.С., Аль-Альфи М.А., Хан М.З. (2014) Механизм, связывающий сахарный диабет и ожирение.Dia Metab Syndr Obes 7: 587–591. https://doi.org/10.2147/DMSO.S67400

Артикул Google Scholar

Alligier M, Meugnier E, Debard C, Scoazec J (2011) Ремодулирование подкожной жировой ткани во время начальной фазы набора веса, вызванного перееданием у человека. J Clin Endocrinol Metab 10 (15): 2314–2327

Google Scholar

Anderson G, James W, Konz E (2017) Ожирение и лечение заболеваний: влияние потери веса на сопутствующие заболевания.J Am Med Assoc. 16: 23–36

Google Scholar

Антон С.Д., Моррисон С.Д., Чефалу В.Т. (2008) Влияние пиколината хрома на потребление пищи и сытость. Diabetes Technol Ther 10 (5): 405–412

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Arciero PJ, Gardner AW, Calles-Escandon J, Benowitz NL, Poehlman ET (2007) Влияние приема кофеина на кинетику NE, окисление жиров и расход энергии у молодых и пожилых мужчин.Am J Physiol 268: 1192–1198

Google Scholar

Baglioni S, Cantini G, Poli G, Francalanci M, Squecco R, Di Franco A et al (2012) Функциональные различия в подушечках висцерального и подкожного жира происходят из-за различий в жировых стволовых клетках. PLOS One 7 (5): e36569. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0036569

ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Banni S (2012) Метаболизм конъюгированной линолевой кислоты.Curr Opin. 13 (3): 261–266

Google Scholar

Belza A, Toubro S, Astrup A (2014) Влияние кофеина, зеленого чая и тирозина на термогенез и потребление энергии. Eur J Clin Nutr 63 (1): 57–64 Epub 2007 Sep 19

Статья CAS Google Scholar

Berdanier CR, Gorny JR, Joussif AE (2000) Advanced Nutrition: Macronutrients, 2nd edn. CRC Press, Бока-Ратон

Google Scholar

Бес-Растролло М., Сабате Дж., Гомес-Грасиа Е., Алонсо А., Мартинес Дж. А., Мартинес-Гонсалес М. А. (2017) Потребление орехов и увеличение веса в средиземноморской когорте: исследование солнца.Ожирение 15 (1): 107–116

Статья Google Scholar

Biesiekierski JR (2017) Что такое глютен? J Gastroenterol Hepatol 32 (1): 78–81. https://doi.org/10.1111/jgh.13703.%20PMID%2028244676

CAS Статья PubMed Google Scholar

Бирбрайр А., Чжан Т., Ван З.М., Месси М.Л., Эниколопов Г.Н., Минц А., Дельбоно О. (2013) Роль перицитов в регенерации скелетных мышц и накоплении жира.Стволовые клетки Dev 22 (16): 2298–2314. https://doi.org/10.1089/scd.2012.0647 PMC 3730538. PMID 23517218

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Bland J, Lyon M, Jones DS (2006) Клинические подходы к детоксикации и биотрансформации. J Med Assoc 5: 34–45

Google Scholar

Блюменфельд Н.Р., Канг Х.Дж., Фенцл А., Сонг З., Чанг Дж. Дж., Сингх Р., Джонсон Р., Каракесили А., Феранил Дж. Б., Россен Н. С., Чжан В., Джагги С., Маккарти Б., Бесслер С., Шварц Г. Дж., Грант R, Korner J, Kiefer FW, Gillette BM, Samuel SK (2018) Прямой подход к трансплантации тканей для увеличения эндогенного коричневого жира.Научный доклад 8 (1). https://doi.org/10.1038/s41598-018-25866-y

Бобылева В., Беллей М., Кнер Н., Ларди Х (2007) Влияние эргостероида 7-оксо-дегидроэпиандростерона на потенциал митохондриальной мембраны: возможная связь с термогенезом. Arch Biochem Biophys 341 (1): 122–128

Статья Google Scholar

Boirie M, Dangin Y, Guillet C, Beaufrere B (2011) Влияние скорости переваривания белка на обмен белка у молодых и пожилых людей.J Nutr 132 (10): 3228S – 3233S

Google Scholar

Бредсдорф Л., Ведебай Э. Б., Николов Н. Г., Халлас-Моллер Т., Пилегаард К. (2015) Кетон малины в пищевых добавках — высокое потребление, мало данных о токсичности — причина для беспокойства по поводу безопасности? Regul Toxicol Pharmacol 73: 196–200

CAS PubMed Статья Google Scholar

Brenot F, Abenhaim L, Moride Y, Rich S, Benichou J, Kurz X et al (2015) Препараты, подавляющие аппетит, и риск первичной легочной гипертензии.N Engl J Med 335: 609

Google Scholar

Brown JC, Harhay MO, Harhay MN (2017) Антропометрический прогноз висцеральной жировой ткани и смертность среди мужчин и женщин в третьем национальном обследовании здоровья и питания (NHANES III). Am J Hum Biol 29 (1): 181–195. https://doi.org/10.1002/ajhb.22898

Артикул Google Scholar

Brownell KD (2009) Greenwood MR Stellar и Eileen E (2009): Эффекты повторяющихся циклов потери и восстановления веса у крыс.Physiol Behav 38 (4): 459

Статья Google Scholar

Bucci LR (2008) Избранные травы и упражнения человека. Am J Clin Nutr 72 (2): 624S – 636S

Артикул Google Scholar

Cabrera C, Artacho R, Giménez R (2006) Благоприятные эффекты зеленого чая; Обзор. J Am Coll Nutr 25 (2): 79–99

CAS PubMed Статья Google Scholar

Cannon B, Nedergaard J, Nute GR (2018) Биология развития: ни жир, ни плоть.Nature 454 (7207): 947–958

ADS Статья CAS Google Scholar

Canoy D (2010) Распределение жировых отложений и риск метаболических нарушений у мужчин и женщин. Curr Opin Endocrinol Diabetes 17: 143–149

Статья CAS Google Scholar

Кармен Г.Ю., Виктор С.М. Сигнальные механизмы, регулирующие липолиз. Сотовый сигнал. 2006. 18 (4): 401–8. https: // doi.org / 10.1016 / j.cellsig.2005.08.009 Epub 2005 22 сентября. PMID: 16182514

CAS PubMed Статья Google Scholar

Chen M, Pan A, Malik VS, Hu FB (2012) Влияние потребления молочных продуктов на массу тела и жир: метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. Am J Clin Nutr 96 (8): 735–747

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Christensen R, Lorenzen JK, Svith CR, Bartels EM, Melanson EL, Saris WH et al (2009) Влияние кальция из молочных и пищевых добавок на экскрецию фекального жира: метаанализ рандомизированных контролируемых исследований.Obes Rev 10 (2): 475–486

CAS PubMed Статья Google Scholar

Cimolai N, Cimolai T, Kessel J (2011) Использование йохимбина для улучшения физического состояния и его потенциальная токсичность. J Diet Suppl 8: 346–354

CAS PubMed Статья Google Scholar

Clapham JC, Arch JR (2007) Термогенные и метаболические препараты против ожирения: обоснование и возможности.Диабет, ожирение, метаболизм 9: 259–275

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Коэльо М., Оливейра Т., Фернандес Р. (2013) Биохимия жировой ткани: эндокринный орган. Arch Med Sci 9 (2): 191–200. https://doi.org/10.5114/aoms.2013.33181

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Cohen PA, Wang YH, Maller G, DeSouza R, Khan IA (2016) Фармацевтические количества йохимбина, обнаруженные в пищевых добавках.Анальный тест на наркотики 8: 357–369

CAS PubMed Статья Google Scholar

Cotten BM, Diamond SA, Banh T, Hsiao YH, Cole RM, Li J et al (2017) Малиновый кетон не снижает ожирение, кроме уменьшения потребления пищи у мышей C57BL / 6, получавших диету с высоким содержанием жиров. Food Funct 8: 1512–1518

CAS PubMed Статья Google Scholar

Coyle LP, Patrick JR (2013) Abete GS (2013): Полезные факты о еде.J Med Food 35 (5): 13–19

Google Scholar

Delbeke FT, Van Eenoo P, Van Thuyne W, Desmet N (2002) Прогормоны и спорт. J Steroid Biochem Mol Biol 83 (1–5): 245–251

CAS PubMed Статья Google Scholar

Демлинг Р.Х. (2009) Влияние гипокалорийной диеты, повышенного потребления белка и силовых тренировок на набор мышечной массы и потерю жировой массы у полицейских с избыточным весом.Ann Nutr Metab 44 (1): 21–29

Статья Google Scholar

Denker T, Joel R, Bland J (2012) Мир на тарелке, 4-е изд. Небраска: Nebraska Press

Деннис Э.А., Денго А.Л., Комбер Д.Л. и др. (2010) Потребление воды увеличивает потерю веса во время низкокалорийной диеты у людей среднего и пожилого возраста. Ожирение 18 (2): 300–307. https://doi.org/10.1038/oby.2009.235

Артикул PubMed Google Scholar

Дхаливал С.С., Велборн Т.А. (2009) Центральное ожирение и многомерный сердечно-сосудистый риск, оцениваемый по шкале прогнозов Фрамингема.Am J Cardiol 103 (10): 1403–1407. https://doi.org/10.1016/j.amjcard.2008.12.048

Артикул PubMed Google Scholar

Din MU, Saari T, Raiko J, Kudomi N, Maurer SF, Lahesmaa M, Tobias Fromme T, Amri EZ, Klingenspor M, Solin O, Nuutila P, Virtanen KA (2018) Постпрандиальный окислительный метаболизм коричневого жира человека указывает на термогенез. Cell Metab 28 (2): 207. https://doi.org/10.1016/j.cmet.2018.05.020

CAS Статья Google Scholar

Divoux A, Drolet R, Clement A (2011) Архитектура и внеклеточный матрикс жировой ткани.Obes Rev 12 (35): 494–503

Статья Google Scholar

Дубнов-Раз Г, Константини Н. В., Ярив Х, Ницца С., Шапира Н. (2011) Влияние употребления воды на расход энергии в покое у детей с избыточным весом. Int J Obes 35 (10): 1295–1300. https://doi.org/10.1038/ijo.2011.130

CAS Статья Google Scholar

Dulloo AG, Geissler CA, Horton T, Collins A, Miller DS (2015) Нормальное потребление кофеина: влияние на термогенез и суточный расход энергии у худых и постабильных людей-добровольцев.Am J Clin Nutr 49 (1): 44–50

Статья Google Scholar

Dulloo AG, Geissler GA, Kangas AJ (2009) Нормальное потребление кофеина: влияние на термогенез и суточный расход энергии у худых и пост-тучных добровольцев. Am J Clin Nutr 49 (1): 44–50

Статья Google Scholar

Duvernoy CS (2011) Риски для здоровья, связанные с диетой йо-йо. J Med Assoc 15 (272): 1169

Google Scholar

Earthman CP, Beckman LM, Masodkar K, Sibley SD (2012) Связь между ожирением и низкими концентрациями 25-гидроксивитамина D в крови: соображения и последствия.Int J Obes (Лондон) 36: 387–396

CAS Статья Google Scholar

Экель С.Е., Долинков М.А., Дост И.К., Лацинов З.Е., Михальск Ю.Д., Халуз Д.В., Касалик Ю.М. (2005) Эндокринный профиль подкожной и висцеральной жировой ткани у пациентов с ожирением. Эндокринол клеток Mol 28 (17): 456–475

Google Scholar

Enerbäck S (2009) Происхождение коричневой жировой ткани. N Engl J Med 360 (19): 2021–2023

PubMed Статья Google Scholar

Eric E, Berg DC (2010) 7 принципов сжигания жира, 1-е изд.Blackwell Science, Оксфорд

Google Scholar

Фаррелл Д. Д., Бауэр Л., Speedy DB (2013) Смертельное отравление водой. Дж. Клин Путь 56 (10): 803–804. https://doi.org/10.1136/jcp.56.10.803-a

Артикул Google Scholar

Fenzl A, Kiefer FW (2014) Коричневая жировая ткань и термогенез. Гормон Mol Biol Clin Investigation 19 (1): 25–37. https://doi.org/10.1515/hmbci-2014-0022 PMID 253

CAS Статья Google Scholar

Fomous CM, Costello RB, Coates PM (2002) Симпозиум: конференция по науке и политике в отношении продуктов, повышающих производительность.34 (10): 1685–1690

Fu C, Jiang Y, Guo J, Su Z (2016) Натуральные продукты с эффектами против ожирения и различными механизмами действия. J Agric Food Chem 64: 9571–9585

CAS PubMed Статья Google Scholar

Gades MD, Stern JS, Walter AH (2002) Добавка хитозана не влияет на всасывание жира у здоровых мужчин, получающих диету с высоким содержанием жиров, пилотное исследование. Int J Obes Relat Metab Disord 26 (1): 119–122

CAS PubMed Статья Google Scholar

Galitzky J, Rivière D, Tran MA, Montastruc JL, Berlan M (1990).Фармакодинамические эффекты хронического лечения йохимбином у здоровых добровольцев. Eur J Clin Pharmacol. 39 (5): 447–51. https://doi.org/10.1007/bf00280934

Gannon MC, Nuttall FQ. Влияние высокобелковой диеты на грелин, глюкагон и инсулиноподобный фактор роста-I у субъектов с ожирением. Обмен веществ. 2011 сентябрь; 60 (9): 1300-1311. DOI: https://doi.org/10.1016/j.metabol.2011.01.016. Epub 2011 15 марта

CAS PubMed Статья Google Scholar

Gittleman AL (2010) Обзор плана диеты для сжигания жира, 3-е изд.Barry Seaars, Mc Groaw-Hill

Gittleman AL (2011) Жирные продукты для промывания, 4-е изд. Калифорния: Сисарс Б. Мак Гроу-Хилл

Гиттлман А.Л. (2012) Сброс жира на всю жизнь: стратегия достижения целей похудания, 5-е изд. Калифорния: Seasars B.Mc Groaw-Hill

Gray JA, Berger M, Roth BL (2016) Расширенная биология серотонина. Анну Рев Мед 60: 355–366

Google Scholar

Greer F, Friars D, Graham TE (2000) Сравнение кофеина и приема теофиллина: упражнения на метаболизм и выносливость.J Appl Physiol 89 (5): 1837–1844

CAS PubMed Статья Google Scholar

Grier PT (2007) Гипонатриемия «водная интоксикация», 4-е изд. Филадельфия: Lippincott Williams & Wilkins

Guerre M, Millo K (2011) Гормоны жировой ткани. J Endocrinol Invest 25 (10): 855–861

Статья Google Scholar

Guo L, Gurda GT, Lee SH, Molkentin JD, Williams JA (2016) Холецистокинин активирует передачу сигналов кальциневрин-NFAT поджелудочной железы in vitro и in vivo.Mol Biol Cell 19 (1): 198–206

Google Scholar

Ha E, Zemel MB (2011) Функциональные свойства сыворотки, ее компонентов и незаменимых аминокислот: механизмы, лежащие в основе пользы для здоровья для активных людей (обзор). J Nutr Biochem 14 (5): 251–258

Статья CAS Google Scholar

Haller CA, Anderson IB, Kim SY, Blanc PD (2012) Оценка выбранных трав.Токсикол, вызывающий нежелательную лекарственную реакцию, ред. 21 (3): 143–150

Статья Google Scholar

Хармс М., Сил П., Пезешкиан С. Коричневый и бежевый жир: развитие, функция и терапевтический потенциал. Nat Med. 2013. 19 (10): 1252–1263. DOI: https: //doi.org/10.1038/nm.3361. PMID 24100998

CAS PubMed Статья Google Scholar

Harris RB (2011) Лептин — гораздо больше, чем сигнал сытости.Энн Рев Нутр 21 (6): 591–600.0

MathSciNet Google Scholar

Hofman Z, Smeets R, Verlaan G, Lugt R, Verstappen PA (2008) Влияние добавок коровьего молозива на выполнение упражнений у элитных хоккеистов на траве. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab 12 (4): 461–469

Артикул Google Scholar

Holm C (2009) Молекулярные механизмы, регулирующие гормоночувствительную липазу и липолиз.Biochem Soc Trans 31 (6): 1120–1124

Статья Google Scholar

Hooper EF, Maglione M, Mojica WA, Suttorp MJ, Rhodes SL, Jungvig L (2015) Снижение потребления насыщенных жиров при сердечно-сосудистых заболеваниях. Кокрановская база данных Syst Rev 10 (6): CD011737

Google Scholar

Hsueh WA, Avula B, Pawar RS (2013) Главный комплекс гистосовместимости играет важную роль в вызванном ожирением воспалении жировой ткани.Cell Metab 17 (3): 411–422

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

Hursel R, Viechtbauer W, Westerterp-Plantenga MS (2016) Влияние зеленого чая на потерю веса и поддержание веса: метаанализ. Инт Дж. Обес (Лондон) 33 (9): 956–961. https://doi.org/10.1038/ijo.2009.135

CAS Статья Google Scholar

Imbeault P, Pelletier C, Tremblay A (2016) Энергетический баланс и загрязнение хлорорганическими соединениями и полихлорированным бифенилом.4 (1): 17–24

Инагаки Т., Сакаи Дж., Каджимура С. Транскрипционный и эпигенетический контроль судьбы и функции коричневых и бежевых жировых клеток. Nat Rev Mol Cell Biol. 2016.17 (8): 480–495. DOI: https: //doi.org/10.1038/nrm.2016.62. PMC 4956538 .PMID 27251423.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Ivy JL (2004) Влияние пирувата и дигидроксиактетона на метаболизм и аэробную выносливость.Медико-спортивные упражнения 30 (6): 837–843

Google Scholar

Jeukendrup AE, Randell R (2014) Жиросжигатели: пищевые добавки для похудания. Obes Rev 12 (10): 841–851. https://doi.org/10.1111/j.1467-789X.2011.00908.x

CAS Статья Google Scholar

Jeukendrup AE, Randell RE, Coates PM (2016) Жиросжигатели: пищевые добавки, которые увеличивают метаболизм жиров.Obes Rev 12 (10): 841–855

Статья CAS Google Scholar

Джонсон Р., Брайант С., Хантли А.Л. (2012) Зеленый чай и зеленый чай для здоровья. J Am sci 23 (7): 81–95

Google Scholar

Джонс О.А., Магуайр М.Л., Гриффин Дж.Л. (2008) Загрязнение окружающей среды и диабет: забытая ассоциация. Ланцет 26 (37): 287–288

Артикул Google Scholar

Julkunen R, Janatuinen E, Kosma M, Mäki M (2012) сравнение диет с овсом и без овса у взрослых с глютеновой болезнью.Кишечник 50 (3): 332–335

Google Scholar

Кан С.Е., Халл Р.Л., Утцшнайдер К.М. (2016) Механизмы, связывающие ожирение с инсулинорезистентностью и диабетом 2 типа. Nature 444 (7121): 840–846

ADS Статья CAS Google Scholar

Karastergiou K, Smith SR, Greenberg AR, Fried SK (2012) Половые различия в жировой ткани человека — биология формы груши. Биол Половые различия 3:13.https://doi.org/10.1186/2042-6410-3-13

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

Karst H, Steiniger J, Noack R, Steglich H (2010) Термогенез, индуцированный диетой у человека: термические эффекты отдельных белков, углеводов и жиров в зависимости от их количества энергии. Ann Nutr Metab 28: 245–252

Статья Google Scholar

Келли Т.Ф., Капур Н.К., Либерман Д.З. (2009) Использование трийодтиронина в качестве вспомогательного средства при резистентном к лечению биполярном расстройстве II типа и биполярном расстройстве БДУ.J Affect Disord 116 (3): 222–226

CAS PubMed Статья Google Scholar

Kennedy A, Martinez K, Schmidt S, Mandrup S, LaPoint K, McIntosh M (2011) Механизмы действия конъюгированной линолевой кислоты против ожирения. J Nutr Biochem 21 (3): 171–179. https://doi.org/10.1016/j.jnutbio.2009.08.003

CAS Статья Google Scholar

Kershaw EE, Flier JS (2004) Жировая ткань как эндокринный орган.J Clin Endocrinol Metab 89 (6): 2548–2556

CAS PubMed Статья Google Scholar

Kersten S (2001) Механизмы питания и гормональной регуляции липогенеза. EMBO Rep 2 (4): 282–286. https://doi.org/10.1093/embo-reports/kve071 PMC 1083868. PMID 11306547

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Kim BH, Lumor SE, Akoh CC (2014) Маргарины, свободные от транс-трансформера, приготовленные из структурированных липидов на основе масла канолы / пальмового стеарина / пальмоядрового масла.J Agric Food Chem 56 (17): 8195–8205

Статья CAS Google Scholar

King MW (2012) Структура и функции гормонов: гормон роста. Clin Endocrinol 65 (4): 413–422

Google Scholar

Киссиг М., Шапира С.Н., Сил П. (2016) Снимок: термогенез коричневого и бежевого жира. Ячейка 166 (1): 258–258.e1. https://doi.org/10.1016/j.cell.2016.06.038

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Кляйн А.В., Киат Х. (2015) Детокс-диеты для выведения токсинов и управления весом: критический обзор доказательств.J Hum Nutr Diet. 28 (6): 675–686. https://doi.org/10.1111/jhn.12286 Epub 2014 18 декабря

CAS Статья PubMed Google Scholar

Кляйн С., Петерс Дж., Холланд Б. Вулф Р. Влияние краткосрочной и долгосрочной бета-адренергической блокады на липолиз во время голодания у людей. Am J Physiol. 2006. 257: E65 – E73.

CAS Статья Google Scholar

La Merrill M, Emond C, Kim MJ, Antignac JP, Le Bizec B, Clément K, Birnbaum LS, Barouki R (2013) Токсикологическая функция жировой ткани: внимание к стойким органическим загрязнителям.Environ Health Perspect 121 (2): 162–169. https://doi.org/10.1289/ehp.1205485

CAS Статья PubMed Google Scholar

Лалчандани С.Г., Лей Л., Чжэн В., Суни М.М., Мур Б.М., Лиггетт С.Б., Миллер Д.Д., Феллер Д.Р. (2002) Димеры йохимбина, проявляющие селективность в отношении подтипа альфа-2С-адренорецептора человека. J Pharmacol Exp Ther. 303 (3): 979–84. https://doi.org/10.1124/jpet.102.039057

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lambert JD, Sang S, Yang CS (2007) Возможные разногласия по поводу диетических полифенолов: преимущества против рисков.Chem Res Toxicol 20 (4): 583–585

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lardy H, Partridge B, Kneer N, Wei Y (2007) Эргостероиды: индукция термогенных ферментов в печени крыс, получавших стероиды, полученные из дегидроэпиандростерона. Proc Natl Acad Sci 92 (14): 6617–6619

ADS Статья Google Scholar

Lenz TL, Hamilton WR, Ernst E (2013) Дополнительные продукты, используемые для похудания.J Am Pharm Assoc 44: 59–67

Статья Google Scholar

Леонард С.Т., Уоррел М.Э., Гурковская О.В., Льюис ПБ, Винсауэр П.Дж. (2014) Влияние 7-кетодегидроэпиандростерона на добровольное потребление этанола у самцов крыс. Алкоголь 45 (4): 349–354

Google Scholar

Леонард В.Р. (2008) Пища для размышлений: изменение режима питания было движущей силой в эволюции человека. Sci Am 287 (6): 106–115

Статья Google Scholar

Li T (2018) Овощи и фрукты: пищевая и лечебная ценность.Соединенные Штаты: CRC Press, стр. 1-2 ISBN 978-1-4200-6873-3

Лим С.С., Вос-Тео Ф., Абрахам Д., Данаи Г., Сибуя К., Адаир-Рохани Х. и др. (2012) Сравнительная оценка риска бремени болезней и травм, связанных с 67 факторами риска и кластерами факторов риска в 21 регионе, 1990–2010 годы: систематический анализ для исследования глобального бремени болезней. Ланцет 380 (9859): 2224–2260. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(12)61766-8

Артикул Google Scholar

Lyon CJ, Law RE, Hsueh WA (2003) Недавно открытые эндокринные функции белой жировой ткани: возможное значение при заболеваниях, связанных с ожирением.Эндокринол 144: 3765–3773

Артикул CAS Google Scholar

Lyon M, Bland J, Jones DS (2016) Клинические подходы к детоксикации и биотрансформации. J Med Assoc 5: 34–45

Google Scholar

MacDonald E, Kobilka BK, Scheinin M (1997) Нацеливание на ген — наведение на функцию альфа-2-адренорецептора. Тенденции Pharmacol Sci 1997; 18 (6): 211–9. https: // doi.org / 10.1016 / s0165-6147 (97) 01063-8

CAS PubMed Статья Google Scholar

Мадгула В.Л., Авула Б., Павар Р.С. (2008) Метаболическая стабильность in vitro и транспорт P57 из Hoodia gordonii в кишечнике. Обзор клинических данных. Planta Medica 73 (4): 280

Google Scholar

Mallard SR, Howe AS, Houghton LA (2016) Статус витамина D и потеря веса: систематический обзор и метаанализ рандомизированных и нерандомизированных контролируемых исследований по снижению веса.Am J Clin Nutr 104: 1151–1159

CAS PubMed Статья Google Scholar

Manore M, Champaign IL, Thompson J (2011) Регулирование окисления жирных кислот в скелетных мышцах. Annual Rev Nutr 19: 463–484

Google Scholar

Manore MM (2015) Пищевые добавки для улучшения композиции тела и снижения массы тела: где доказательства? Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab 22: 139–154

Статья Google Scholar

Mehta T, Smith DL Jr, Muhammad J, Casazza K (2014) Влияние смены веса на риск заболеваемости и смертности.Obes Rev 15 (11): 870–881. https://doi.org/10.1111/obr.12222

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Millan MJ, Mannoury CC, Chanrion B (2012) Роль серотонина в расстройствах пищевого поведения. J Pharm Exp Ther 340 (3): 750–764

CAS Статья Google Scholar

Montama JP, Coutre IL, Conner KS (2010) In: Berg JM (ed) Определение жира, вкус, текстура и эффекты после переваривания пищи, 3-е изд.Springer, New York,

Muckelbauer R, Sarganas G, Grüneis A, Müller-Nordhorn J (2013) Связь между потреблением воды и показателями массы тела: систематический обзор. Am J Clin Nutr 98 (2): 282–299. https://doi.org/10.3945/ajcn.112.055061

CAS Статья PubMed Google Scholar

Мудрый А.Н., Ю Н, Аукема Х.М. (2014) Пищевая ценность и польза зернобобовых для здоровья. Appl Physiol Nutr Metab 39 (11): 1197–1204.https://doi.org/10.1139/apnm-2013-0557.%20PMID%2025061763

CAS Статья PubMed Google Scholar

Муссолино М.Э., Инграм Д.Д., Бойрит С.Е. (2010) Потеря веса в результате максимальной массы тела и смертности: Связанный файл смертности третьего национального исследования здоровья и питания. Int J Obes 34: 1044–1050

Статья Google Scholar

Naber AH, Laflamme DP, Hannah SS (2015) Повышенный метаболизм белка способствует потере жира и снижает потерю безжировой массы тела во время похудания.Стажер J Appl Res Vet Med 3 (2): 62–79

Google Scholar

Naber AH, Wanten GJ, Boirit SE (2014) Клеточные и физиологические эффекты триглицеридов со средней длиной цепи. Mini Rev Med Chem 4 (8): 847–857

Google Scholar

Nagai M, Komiya H, Mori Y, Ohta T., Kasahara Y, Ikeda Y (2015) Оценка площади висцерального жира с помощью многочастотного биоэлектрического импеданса. Уход за диабетом 33 (5): 1077–1079.https://doi.org/10.2337/dc09-1099

Артикул Google Scholar

Nawrot P, Jordan S, Leonard S (2013) Влияние кофеина на здоровье человека. Пищевая добавка Contam 20 (1): 1–30

Статья Google Scholar

Naz A, Butt MS, Sultan MT, MMN Q, Niaz RS (2014) Арбузный ликопин и связанные с ним заявления о пользе для здоровья. EXCLI J 13: 650–660

PubMed PubMed Central Google Scholar

Nordqvist C, Gesta S, Tseng YH, Kahn CR (2012) Высокая распространенность коричневой жировой ткани у взрослых людей.J Clin Endocrinol Metab 96 (8): 2450–2455

Onakpoya I, Hunt K, Wider B, Ernst E (2014) Добавка пирувата для похудания: систематический обзор и метаанализ рандомизированных клинических испытаний. Crit Rev Food Sci Nutr 54: 17–23

CAS PubMed Статья Google Scholar

Onakpoya I, Posadzki P, Ernst E (2013) Добавки хрома при избыточном весе и ожирении: систематический обзор и метаанализ рандомизированных клинических испытаний.Obes Rev 14: 496–507

CAS PubMed Статья Google Scholar

Онакпоя И.Дж., Посадски П.П., Уотсон Л.К., Дэвис Л.А., Эрнст Э. (2012) Эффективность длительного приема добавок конъюгированной линолевой кислоты (КЛК) на состав тела людей с избыточным весом и ожирением: систематический обзор и метаанализ рандомизированных клинических исследований. Eur J Nutr 51 (2): 127–134. https://doi.org/10.1007/s00394-011-0253-9

CAS Статья PubMed Google Scholar

Парих С.Дж., Яновский Ю.А., Сибли С.Д. (2003) Потребление кальция и ожирение.Am J Clin Nutr 77: 281–287

CAS PubMed Статья Google Scholar

Park K (2010) Кетон малины увеличивает как липолиз, так и окисление жирных кислот в адипоцитах 3 T3-L1. Planta Medica 76 (15): 1654–1658

CAS PubMed Статья Google Scholar

Parra DK, Abete GS, Crujeiras AE, Goyenechea EB, Martinez JA (2008) Диета, богатая длинноцепочечными жирными кислотами омега-3, модулирует чувство насыщения у добровольцев с избыточным весом и ожирением во время потери веса.J Hum Nutr Diet 13 (6): 491–500

Google Scholar

Pathak K, Soares MJ, Calton EK, Zhao Y, Hallett J (2014) Статус массы тела витамина D: систематический обзор и метаанализ рандомизированных контролируемых испытаний. Obes Rev 15: 528–537

CAS PubMed Статья Google Scholar

Paul CB (2009) Питательные вещества, ускоряющие сжигание жира, и почему вы должны включать их в свой рацион, 18-е изд.McGraw-Hill, Бостон

Google Scholar

Пол Г.С., Мэри Л.С., Мортон ММП, Уолтер А.М., Родс Ф.А., MSL, Ганье М.С. (2011) Эффективность и безопасность эфедры и эфедрина для похудания и спортивных результатов: метаанализ. JAMA 289: 1537–1545

Google Scholar

Picco MF (2012) Очищение толстой кишки — хороший способ вывести токсины из организма? Colorectal Dis 11: 686 Mayo Clinic, Джексонвилл, Флорида

Google Scholar

Podder K, Kolge S, Benzman L, Mullin G, Cheskin L (2011) Нутрицевтические добавки для похудания: системный обзор.Nutr Clin Pract 26 (50): 539–552

Артикул Google Scholar

Pooyandjoo M, Nouhi M, Shab-Bidar S, Djafarian K, Olyaeemanesh A (2016) Влияние (L-) карнитина на потерю веса у взрослых: систематический обзор и метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. Obes Rev 17: 970–976

CAS PubMed Статья Google Scholar

Porter SA, Massaro JM, Hoffmann U, Fox CS (2009) Подкожная жировая ткань брюшной полости: защитное депо жира? Diab Care 32 (6): 1068–1075

Артикул Google Scholar

Prentice AM (2017) Макроэлементы как источники пищевой энергии.New England J Med 8 (7): 932–939. https://doi.org/10.1079/PHN2005779

Артикул Google Scholar

Раджамохан Т., Сандхья В.Г., Шнайдер П. (2016) Влияние кокосовой воды на липидный обмен у крыс, получавших холестерин. J Med Food 9 (3): 400–407

Google Scholar

Рамдат Д., Ренвик С., Дункан А.М. (2016) Роль зернобобовых в диетическом управлении диабетом.Can J Diabetes 40 (4): 355–363. https://doi.org/10.1016/j.jcjd.2016.05.015

Артикул PubMed Google Scholar

Rao N, Spiller HA, Hodges NL, Chounthirath T, Casavant MJ, Kamboj AK et al (2017) Центры токсикологического контроля США сообщили об увеличении воздействия пищевых добавок. J Med Toxicol 24 (4): 56–68

Google Scholar

Reiner S, Ambrosio M, Hoffmann C, Lohse MJ (2010) Дифференциальная передача сигналов эндогенных агонистов бета2-адренорецептора.J Biol Chem 285 (46): 36188–98. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.175604

CAS PubMed Статья Google Scholar

Reuter SE, Evans AM (2012) Карнитин и ацилкарнитины: фармакокинетические, фармакологические и клинические аспекты. Clin Pharmacokinet 51: 553–572

CAS PubMed Статья Google Scholar

Rhoades RA, Tanner GA (2003) Медицинская физиология, 2-е изд.Липпинкотт Уильямс и Уилкинс, Балтиморский ISBN 0-7817-1936-4. OCLC 50554808

Google Scholar

Rios-Hoyo A, Salmean G, Nyangono G (2016) Новые диетические добавки от ожирения: что мы знаем в настоящее время. Curr Obes Rep 5: 262–270

PubMed Статья Google Scholar

Робергс Р.А., Кетейян С.Дж. (2013) Основы физиологии упражнений: для фитнеса, работоспособности и здоровья, 2-е изд.McGraw-Hill Higher Education, Бостон

Google Scholar

Розенберг И.Х., Попкин Б.М., Д’Анси К.Э. (2010) Богатая водой еда и здоровье. Nutr Rev 68 (8): 439–458. https://doi.org/10.1111/j.1753-4887.2010.00304.x

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

Schmitt JA, Coutre IL, Wilkins SE (2015) Пищевые ингредиенты и когнитивные способности. Curr Opin Clin Nutr Metab Care 11: 706–710

Google Scholar

Шнайдер П., Сандхья В.Г., Раджамохан Т. (2016) Положительное влияние кокосовой воды на липидный обмен у крыс, получавших холестерин.J Med Food 9 (3): 400–407

Google Scholar

Schwenk TL, Hardy ML, Costley CD (2003) Когда пища становится лекарством: использование неанаболических пищевых добавок у спортсменов. Am J Sports Med 30 (6): 907

Статья Google Scholar

Serna-Saldivar SO (2015) Зерновые: лабораторные справочные материалы и руководство по процедурам. Технология консервирования пищевых продуктов. Соединенное Королевство: Тейлор и Фрэнсис, стр. 58 ISBN 978-1-4398-5565-2

Shekelle PG, Hardy ML, Morton SC, Maglione M, Mojica WA, Suttorp MJ, Rhodes SL, Jungvig L, Gagne J ( 2003b) Эффективность и безопасность эфедры и эфедрина для похудания и спортивных результатов.JAMA 289 (12): 1537–1545

CAS PubMed Google Scholar

Shekelle PG, Hardy ML, Morton SC, Maglione M, Mojica WA, Suttorp MJ et al (2003a) Эффективность и безопасность эфедры и эфедрина для похудания и спортивных результатов: метаанализ. JAMA 289: 1537–1545

CAS PubMed Google Scholar

Smith C, Krygsman A, Ogawa H (2014) Hoodia gordonii: есть или не есть.J Ethnopharmacol 155: 987–991

PubMed Статья Google Scholar

Смит И.К. (2016) Проблема с жиросжигающими таблетками. Эндокринол 55: 123–143

Google Scholar

Soerensen KV, Thorning TK, Astrup A, Kristensen M, Lorenzen JK (2014) Влияние молочного кальция из сыра и молока на фекальное выделение жира, липиды крови и аппетит у молодых мужчин. Am J Clin Nutr 99: 984–991

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Spadafranca A, Rinelli S, Riva A, Morazzoni P, Magni P, Bertoli S. et al (2013) Экстракт Phaseolus vulgaris влияет на гликометаболический контроль и контроль аппетита у здоровых людей.Br J Nutr 109: 1789–1795

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Stookey JD, Constant F, Popkin BM, Gardner CD (2008) Питьевая вода связана с потерей веса у женщин с избыточным весом, независимо от диеты и активности. Ожирение 16 (11): 2481–2488. https://doi.org/10.1038/oby.2008.409

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

Stunkard AJ, Harris JR, Pederson NL, McClearn GE (2007) Генетические различия в метаболизме и регуляции жировой ткани.N Engl J Med 322: 1483–1487

Статья Google Scholar

Sulcová J, Hampl R, Hill M, Stárka L, Novácek A (2005) Отсроченные эффекты краткосрочного трансдермального применения 7-оксо-дегидроэпиандростерона на его метаболиты, некоторые гормональные стероиды и соответствующие протеогормоны у здоровых добровольцев мужского пола. Clin Chem Lab Med 43 (2): 221–227

PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

Terry L (2011) Полезные для здоровья свойства фруктов и овощей.Соединенное Королевство: CABI, pp 2–4 ISBN 978-1-84593-529-0

Tian H, Guo X, Wang X, He Z, Sun R, Ge S et al (2016) Добавка пиколината хрома при избыточном весе или тучные взрослые. Кокрановская база данных Syst Rev.11: CD010063

Google Scholar

Trayhurn PY, Wood NS (2004) Adipokines: воспаление и плейотропная роль белого жира. J Clin Sci 92 (3): 347–355

CAS Google Scholar

Turcotte LP (2000) Потребление жирных кислот в мышцах во время упражнений: возможный механизм.Exerc Sport Sci Rev 28 (1): 4–9

CAS. PubMed Google Scholar

Uckoo RM, Jayaprakasha GK, Nelson SD, Patil BS (2011) Быстрое одновременное определение аминов и органических кислот в цитрусовых с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии. Таланта 83: 948–954

CAS PubMed Статья Google Scholar

van Avesaat M, Troost FJ, Westerterp-Plantenga MS, Helyes Z, Le Roux CW, Dekker J et al (2016) Сытость, вызванная капсаицином, связана с желудочно-кишечным расстройством, но не с высвобождением гормонов сытости.Am J Clin Nutr 103: 305–313

PubMed Статья CAS Google Scholar

Vanhala M, Saltevo J, Soininen P, Kautiainen H, Kangas AJ, Ala-Korpela M, Mäntyselkä P (2012) Полиненасыщенные жирные кислоты омега-6 в сыворотке и метаболический синдром: продольное популяционное когортное исследование. Plant Biotechnol J 176 (3): 253–260

Google Scholar

Видж В.А., Джоши А.С. (2013) Влияние термогенеза, вызванного водой, на массу тела, индекс массы тела и состав тела у субъектов с избыточным весом.J Clin Diagn Res 7 (9): 1894–1896. https://doi.org/10.7860/JCDR/2013/5862.3344

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

Villarroel P, Villalobos E, Reyes M, Cifuentes M (2014) Кальций, ожирение и роль рецептора, чувствительного к кальцию. Nutr Rev 72: 627–637

PubMed Статья Google Scholar

Винсент Дж. Б., Сак Д. А., Роффман М., Финч М., Коморовски Дж. Р. (2003) Потенциальная ценность и токсичность пиколината хрома в качестве пищевой добавки, средства для похудания и средства для развития мышц.Sports Med 33 (3): 213–230

PubMed Статья Google Scholar

Виртанен К.А., Лиделл М.Э., Орава Дж., Хеглинд М., Вестергрен Р., Ниеми Т. и др. (2009) Функциональная коричневая жировая ткань у здоровых взрослых. N Engl J Med 360: 1518–1525

CAS PubMed Статья Google Scholar

Wardlaw DF, Gordon ME, Kessel MJ (2002) Perspectives in Nutrition, 5-е изд.McGraw-Hill, Бостон

Google Scholar

Westerterp-Plantenga MS (2010) Катехины зеленого чая, кофеин и регулирование массы тела. Physiol Behav 100 (1): 42–46

CAS PubMed Статья Google Scholar

Westerterp-Plantenga MS, Lejeune MP, Kovacs EM (2005) Потеря веса тела и поддержание веса в связи с привычным потреблением кофеина и добавками зеленого чая.Obes Res 13 (7): 1195–1204

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Уилан А.М., Юргенс Т.М., Сзето В. (2010) Отчет о болезни. Эффективность худии для похудания: есть ли доказательства, подтверждающие утверждения об эффективности? J Clin Pharm Ther 35: 609–612

CAS PubMed Статья Google Scholar

Whingham LD, Watras CA, Scholler DA (2007) Эффективность конъюгированной линолевой кислоты для уменьшения жировой массы: метаанализ на людях.Am J Clin Nutr 85 (5): 1203–1200

Артикул Google Scholar

Whitehead A, Beck EJ, Tosh S, Wolever TM (2014) Эффекты снижения холестерина β-глюкана овса: метаанализ рандомизированных контролируемых испытаний. Am J Clin Nutr 100 (6): 1413–1421. https://doi.org/10.3945/ajcn.114.086108

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Whiting S, Derbyshire EJ, Tiwari B (2014) Могут ли капсаициноиды помочь в управлении весом? Систематический обзор и метаанализ данных о потреблении энергии.Аппетит 73: 183–188

CAS PubMed Статья Google Scholar

Wilson JE, Thomas DR, Margaret MG, Morley RT (2011) Обзор снижения веса. Am J of Clin Nutr 83 (4): 735–743

Google Scholar

Wood JD, Enser M, Fisher AV, Nute GR, Sheard PR, Richard RD (2008) Отложение жира, состав жирных кислот и качество мяса: обзор. Meat Sci 78 (4): 343–358

CAS PubMed Статья Google Scholar

Yang L, Ying C, Zhen Y (2004) Стабильность конъюгированных изомеров линолевой кислоты в липидах яичного желтка во время жарки.Food Chem 86 (4): 531–535

CAS Статья Google Scholar

Яновски Дж. А., Парих С. ​​Дж., Янофф Л. Б., Денкингер Б. И., Калис К. А., Рейнольдс Дж. К. и др. (2009) Влияние добавок кальция на массу тела и ожирение у взрослых с избыточным весом и ожирением: рандомизированное исследование. Ann Intern Med 15 (6): 821–829

Статья Google Scholar

Ylitalo R, Lehtinen S, Wuolijoki E, Ylitalo P, Lehtimaki T (2012) Снижающие холестерин свойства и безопасность хитозана.Arzneimittelforschung 52 (1): 1–7

Google Scholar

Янг Л., Андерсон Дж., Роуч Дж. (2010) Обзор диеты с клетчаткой 35, 3-е изд. США: Энджи К. Мак Гроу-Хилл

Загорска М.Б., Кроткевски М., Ольшанецка М., Зураковски А. (2011) Эффект хитозана в комплексном лечении ожирения. Пол Меркуриуш Лек 13 (74): 129–132

Google Scholar

Зенк Дж. Л., Фрестедт Дж. Л., Кусковский М. А. (2012) HUM5007, новая комбинация термогенных соединений и 3-ацетил-7-оксо-дегидроэпиандростерон: каждый из них увеличивает скорость метаболизма в покое у взрослых с избыточным весом.J Nutr Biochem 18 (9): 629–634

Статья CAS Google Scholar

.